TFE3融合蛋白通过转录上调CDKN1A/p21加剧TFE3重排肾细胞癌的恶性进展

本研究针对TFE3重排肾细胞癌(TFE3-rRCC)预后差的临床难题，揭示了TFE3融合蛋白通过转录上调CDKN1A/p21的双重作用机制：胞质定位的p21通过AKT通路促进肿瘤抗凋亡和迁移，而核内p21诱导细胞衰老(SASP)并分泌IL-6/IL-8重塑肿瘤微环境。该研究为TFE3-rRCC的靶向治疗提供了新思路。

　　

肾细胞癌中有一类特殊亚型——TFE3重排肾细胞癌(TFE3-rRCC)，因其侵袭性强、预后差而被WHO单独分类。这类肿瘤由TFE3基因与ASP^L、PRCC等伙伴基因发生染色体易位形成融合蛋白驱动，但具体致癌机制尚未完全阐明。值得注意的是，既往研究发现细胞周期调控蛋白CDKN1A/p21在TFE3-rRCC中异常高表达，但其在肿瘤发生发展中的作用却存在争议：既有研究显示p21能抑制细胞周期，也有证据表明其可能促进肿瘤进展。这种矛盾现象的背后，是否隐藏着不为人知的分子机制？

南京大学医学院附属鼓楼医院泌尿外科甘卫东团队通过系统研究，首次揭示了TFE3融合蛋白通过转录上调CDKN1A/p21的双面作用机制：一方面，激活的AKT使部分p21滞留胞质，通过结合JNK、ASK1等蛋白发挥抗凋亡作用，同时促进肿瘤细胞迁移；另一方面，核内保留的p21诱导细胞衰老(CS)，分泌以IL-6和IL-8为核心的衰老相关分泌表型(SASP)因子，招募髓系抑制细胞(MDSCs)等免疫抑制细胞，重塑肿瘤微环境。该研究为理解TFE3-rRCC的恶性进展提供了全新视角，发表于《Scientific Reports》。

研究人员运用了多项关键技术：通过染色质免疫沉淀(ChIP)和双荧光素酶报告基因验证TFE3融合蛋白对CDKN1A的转录调控；采用核质分离和免疫荧光明确p21的亚细胞定位；利用裸鼠移植瘤模型评估致癌性；结合Luminex液相芯片全面分析SASP因子谱；基于GEO数据库(GSE167573等)进行生物信息学分析。

主要研究结果：

1. 1.

   CDKN1A/p21是TFE3融合蛋白的靶基因

   ChIP-seq和ChIP-qPCR证实TFE3及其融合蛋白能直接结合CDKN1A启动子区。双荧光素酶报告实验显示NONO-TFE3和PRCC-TFE3可使CDKN1A启动子活性提高3-5倍。值得注意的是，这种调控不依赖TP53通路，Sanger测序证实UOK109/UOK120细胞系不存在TP53突变。

2. 2.

   p21在胞质和核内双重定位

   对33例临床样本的免疫组化分析显示，81.8%(27/33)病例p21阳性，其中70.4%(19/27)以胞质定位为主。机制研究发现，AKT抑制剂MK2206处理可显著减少p21的胞质迁移，证实AKT磷酸化是调控关键。

3. 3.

   胞质p21的促瘤作用

   敲低p21使细胞凋亡率增加2.1-2.8倍，Caspase 3活性上调；免疫共沉淀(Co-IP)显示p21能与JNK、ASK1形成复合物。Transwell实验表明p21敲除使细胞迁移能力下降60%-75%。

4. 4.

   核内p21诱导细胞衰老

   β-半乳糖苷酶染色显示，过表达TFE3融合蛋白的HK-2细胞衰老标志物活性增强3-4倍。裸鼠实验中，NONO-TFE3组的肿瘤体积比对照组大2.3倍，且衰老相关蛋白p16表达显著上调。

5. 5.

   SASP因子重塑微环境

   Luminex检测发现UOK109/UOK120细胞分泌IL-6、IL-8等因子水平比正常细胞高5-8倍。生物信息学分析显示TFE3-rRCC样本中MDSCs等抑制性免疫细胞浸润显著，与KEGG富集到的"细胞因子-受体相互作用"通路高度吻合。

这项研究创新性地阐释了CDKN1A/p21在TFE3-rRCC中的"双刃剑"作用：TFE3融合蛋白通过转录上调p21，既通过胞质定位促进肿瘤存活和转移，又通过核内保留诱导衰老相关分泌表型，形成促肿瘤微环境。这一发现不仅解决了长期以来关于p21在TFE3-rRCC中作用争议的问题，更提出了靶向p21亚细胞分布或阻断IL-6/IL-8信号的治疗新策略。特别是SASP因子与免疫微环境的关联，为联合免疫检查点抑制剂(ICI)治疗提供了理论依据，具有重要的临床转化价值。