miRNA-21a-5p通过靶向RBMS3调控TGFBR1/SMAD2/3通路促进短暂性脑缺血发作后脑血管新生的机制研究

（编辑推荐）本研究首次揭示miRNA-21a-5p在短暂性脑缺血发作（TIA）后通过靶向RNA结合蛋白RBMS3，激活TGFBR1/SMAD2/3信号通路促进脑血管新生的分子机制。通过动物模型（8分钟MCAO）和细胞模型（1小时OGD/R）双重验证，发现该miRNA可上调VEGF/Ang-1等促血管因子，为TIA后脑损伤修复提供全新治疗靶点。

　　

1 引言

短暂性脑缺血发作（TIA）作为脑卒中的重要前兆，其病理机制涉及选择性神经元凋亡和脑血流量障碍。尽管MRI未显示梗死灶，但长期可导致认知障碍和脑萎缩。脑血管新生是修复TIA后脑损伤的关键过程，而微小RNA（miRNA）在缺血性卒中中发挥重要调控作用。其中miRNA-21a-5p在血管平滑肌和内皮细胞高表达，但其在TIA后血管新生中的作用尚未阐明。

2 材料与方法

采用改良线栓法建立C57BL/6小鼠TIA模型（8分钟MCAO），并通过小RNA测序筛选差异表达miRNA。体外采用原代脑微血管内皮细胞（mBMECs）构建1小时氧糖剥夺/复氧（OGD/R）模型。通过双荧光素酶报告基因验证miRNA-21a-5p与靶基因RBMS3的相互作用，并利用AAV-shRBMS3和miRNA拮抗剂/模拟物进行功能验证。

3 结果

3.1 miRNA-21a-5p在TIA后脑组织中上调

小RNA测序显示miRNA-21a-5p是TIA后变化最显著的miRNA，其表达在缺血后第3天达峰值。脑室注射antagomir可有效敲低其表达，而agomir则显著过表达。

3.2 miRNA-21a-5p促进TIA后血管新生

过表达miRNA-21a-5p显著增加VEGF和Ang-1蛋白水平，CD31/Ki67双阳性细胞数提升2.1倍；敲低该miRNA则使FITC标记的灌注微血管密度下降47%。

3.3 RBMS3是miRNA-21a-5p的直接靶标

生物信息学预测和RIP实验证实RBMS3 3'UTR存在miRNA-21a-5p结合位点。TIA后RBMS3 mRNA和蛋白水平分别降低68%和52%，与miRNA-21a-5p呈负相关。

3.4 RBMS3抑制逆转血管新生障碍

AAV-shRBMS3处理使敲低miRNA-21a-5p小鼠的TGFBR1表达恢复至基线水平，SMAD2/3磷酸化提升3.3倍，微血管密度增加81%。

3.5 体外模型验证

1小时OGD/R处理的mBMECs中，miRNA-21a-5p抑制剂使细胞迁移距离缩短62%，而si-RBMS3转染可使其迁移能力恢复至对照组的85%。

4 讨论

本研究首次阐明miRNA-21a-5p/RBMS3/TGFBR1轴在TIA后血管新生中的调控作用。该通路通过影响内皮细胞增殖、迁移和管腔形成，为开发靶向miRNA的神经保护策略提供理论依据。未来需进一步探索RBMS3对SMAD2 mRNA的直接调控作用。