YAP1::TFE3融合蛋白介导内皮-间质转化在血管内皮瘤中的关键作用及机制研究

这篇研究揭示了YAP1::TFE3（YT）融合蛋白通过独立于TEAD活性的机制驱动内皮-间质转化（EndMT），促进血管内皮瘤（EHE）的迁移和抗失巢凋亡特性。研究首次证明TFE3的bHLH-LZ结构域是EndMT的必要条件，而靶向TFE3二聚化的抗组胺药特非那定可逆转表型，为EHE的精准治疗提供了新靶点。

　　

引言

血管内皮瘤（EHE）是一种罕见的血管肉瘤，其分子特征为WWTR1::CAMTA1或YAP1::TFE3（YT）基因融合。尽管既往研究认为EHE的发病机制与Hippo通路异常激活相关，但YT驱动的生物学特性尚未明确。本研究通过构建内皮细胞模型，首次揭示了YT通过非经典途径诱导内皮-间质转化（EndMT）的机制。

研究方法

团队利用慢病毒载体在永生化小鼠内皮细胞（MS1）和人脐静脉内皮细胞（HUVEC）中诱导表达YT融合蛋白，通过RNA测序、免疫印迹和功能实验（划痕实验、悬浮培养）分析表型变化。关键突变体包括：

1. 1.

   YT^S94A：破坏TEAD结合域

2. 2.

   YT^Δdd：删除TFE3的bHLH-LZ二聚化域

3. 3.

   TFE3^S47A：稳定型TFE3突变体

核心发现

1. YT驱动EndMT转录重编程

RNA-seq显示YT上调1117个基因（如间质标记物Acta2、Tgm2），下调251个内皮基因（如Epas1、Fli1）。基因富集分析（GSEA）证实YT激活EMT特征通路，同时抑制内皮细胞特征基因集。

2. TEAD非依赖性EndMT机制

尽管YT保留TEAD结合能力，但YT^S94A突变体和TEAD抑制剂K-975处理均显示：

• •

  保留EndMT表型（迁移增强、抗失巢凋亡）

• •

  仅部分减弱3D病灶形成能力

  提示TEAD活性对转化有贡献，但非EndMT的必要条件。

3. TFE3二聚化域的关键作用

YT^Δdd（缺失bHLH-LZ域）完全丧失EndMT诱导能力，表现为：

• •

  无法激活TFE3靶基因Trpm1

• •

  丧失悬浮培养存活能力

• •

  内皮/间质标志物表达恢复基线水平

  抗组胺药特非那定（抑制TFE3二聚化）可逆转YT的促存活效应，证实TFE3域是治疗靶点。

4. 体内验证

YT-MS1异种移植瘤显示：

• •

  增强的血管生成和胶原沉积（Masson染色）

• •

  肿瘤细胞广泛表达α-SMA

• •

  转录水平维持Acta2上调、Epas1抑制

讨论与意义

本研究突破性地揭示了YT通过TFE3依赖性但TEAD非依赖性机制驱动EndMT，挑战了EHE单纯依赖Hippo通路的传统认知。特别值得注意的是：

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  治疗策略：靶向TFE3二聚化（如特非那定衍生物）可能优于TEAD抑制剂

• •

  疾病异质性：YT-EHE与WWTR1-CAMTA1融合亚型存在显著生物学差异，支持其单独分类

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  转化医学价值：EndMT相关表型（迁移、耐药）为遏制EHE转移提供了新干预窗口

技术亮点

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  多模型验证：涵盖小鼠/人源内皮细胞，增强结论普适性

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  双维度抑制：遗传学（突变体）+药理学（K-975、特非那定）交叉验证机制

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  临床关联性：首次将TFE3抑制剂引入EHE治疗探索