单细胞RNA测序揭示原发性膜性肾病外周B细胞免疫学改变及其调控机制

这篇研究通过单细胞RNA测序（scRNA-seq）技术，系统解析了原发性膜性肾病（PMN）患者外周血单个核细胞（PBMC）中B细胞的异质性及功能多样性，重点揭示了亚群0浆细胞（subcluster 0 plasma cells）和B10调节性B细胞（Breg）在PMN发病中的关键作用，并发现BAFF通路和半乳糖凝集素-9（galectin-9）可能通过单核细胞交互调控B细胞活性，为PMN的免疫治疗提供了新靶点。

　　

引言

原发性膜性肾病（PMN）是成人肾病综合征的主要病因，其特征为肾小球基底膜（GBM）增厚和上皮下免疫复合物沉积。尽管磷脂酶A2受体（PLA2R）等足细胞抗原的发现推动了诊断进展，但B细胞在PMN中的免疫病理机制仍不明确。本研究利用单细胞RNA测序（scRNA-seq）技术，首次全面描绘了PMN患者外周B细胞的转录组图谱，揭示了其亚群动态与疾病关联。

材料与方法

研究纳入6例经肾活检确诊的PMN患者和3例健康对照（NC），通过BD Rhapsody系统进行PBMC的scRNA-seq分析。数据经Seurat和Harmony整合，采用伪批量分析（pseudobulk）鉴定差异表达基因（DEGs），并通过hdWGCNA、CellChat和SCENIC等方法解析细胞互作及转录调控网络。

结果

免疫细胞图谱：PMN患者中性粒细胞比例显著升高（P=0.024），浆细胞比例增加至6.9%（NC为3.1%，P=0.048）。B细胞亚群中，浆细胞和Breg细胞的DEGs最显著，分别涉及ATP水解和免疫激活信号通路。

浆细胞亚群：亚群0浆细胞（高表达RPS10）在PMN中占比58.9%，显示更强的自身免疫活性（如ITPR3上调）和核糖体通路激活。hdWGCNA分析发现，其基因模块与24小时尿蛋白（24h proteinuria）和PLA2R抗体（aPLA2Rab）水平正相关。

Breg细胞功能：B10细胞（高表达CD1D和TGFβ1）在PMN中占比47.8%，较NC显著增加，并通过IL-10分泌增强免疫调节能力。其基因模块与aPLA2Rab水平相关，提示参与抗体调控。

细胞互作：CD14⁺单核细胞通过BAFF（TNFSF13B）和galectin-9（LGALS9）与浆细胞及Breg细胞交互，受体TNFRSF13C（BAFFR）和HAVCR2表达上调，形成促炎微环境。

临床验证：PMN患者血清galectin-9水平显著高于其他肾病患者（P<0.001），且与eGFR负相关（r=-0.367），ROC曲线下面积（AUC）达0.766，提示其作为生物标志物的潜力。

讨论

研究首次明确亚群0浆细胞和B10细胞在PMN中的分化轨迹及功能异质性。BAFF和galectin-9通路的发现为靶向治疗提供依据，如已用于狼疮的Belimumab（抗BAFF单抗）或可拓展至PMN。galectin-9的双向调控作用（抑制B细胞活化但促进Treg功能）需进一步验证。

局限性

样本量较小且缺乏治疗后随访，需扩大队列并结合BCR测序深化研究。动物模型和体外实验将有助于验证galectin-9的机制。

结论

该研究为PMN的免疫发病机制提供了高分辨率图谱，锁定浆细胞亚群和Breg细胞为关键效应细胞，并提出galectin-9作为潜在治疗靶点，为精准免疫干预奠定基础。