巨噬细胞组成型雄烷受体通过调控TLR4信号通路减轻内毒素性肝损伤的机制研究

这篇研究揭示了巨噬细胞中组成型雄烷受体（CAR）通过直接结合Toll样受体4（TLR4） mRNA并抑制其稳定性，进而阻断TLR4/NFκB信号通路激活的创新机制。研究团队通过构建巨噬细胞特异性Car敲除小鼠和Tlr4?/?小鼠模型，结合临床药物（如TCP、DEX）验证了CAR激动剂通过调控巨噬细胞极化（抑制M1型标志物iNOS/CD86）减轻内毒素（LPS/GaIn）诱导的肝损伤，为脓毒症相关肝衰竭提供了新的治疗靶点。

　　

巨噬细胞CAR的发现与功能验证

研究首次在人和小鼠巨噬细胞（包括Kupffer细胞）中检测到组成型雄烷受体（CAR）的高表达，其蛋白水平约为肝细胞的34%。通过免疫荧光观察到CAR激动剂TCP（小鼠）和CITCO/DEX（人）可诱导CAR核转位。在LPS刺激的巨噬细胞中，CAR激活显著降低M1型标志物CD86⁺（流式细胞术显示下降50%）和iNOS表达（荧光强度减少70%），并抑制IL6、TNFα等促炎因子释放。

CAR激动剂的肝保护效应

在LPS/D-半乳糖胺（GaIn）诱导的小鼠急性肝损伤模型中，TCP预处理使血清ALT/AST水平分别降低77%和82%，肝组织病理显示出血和TUNEL⁺凋亡细胞减少60%。RNA-seq分析揭示CAR激活显著下调TLR4/NFκB通路相关基因（如Tlr4、Il1β），GSEA富集分析证实NFκB信号抑制（NES=1.78）。Western blot显示TCP处理组p-IKK、p-IκBα和p-NFκB p65蛋白表达量降低40%-60%，而IκBα水平回升2倍。

巨噬细胞-肝细胞互作机制

通过RAW264.7-AML12共培养实验发现，TCP预处理的巨噬细胞可阻断TLR4信号向肝细胞的传递，使下游肝细胞中p-NFκB p65和iNOS表达降低50%。AAV8-F4/80-shCar构建的巨噬细胞特异性Car敲除小鼠中，TCP的肝保护作用完全消失：血清ALT水平维持在高位（>2000 U/L），肝组织iNOS⁺F4/80⁺巨噬细胞浸润未减少。

TLR4依赖性的分子机制

在Tlr4^?/?小鼠中，TCP无法改善LPS/GaIn引起的肝损伤。体外实验证实CAR通过结合Tlr4 mRNA的B结构域（780-1639 bp），使其半衰期从155.7分钟缩短至96.4分钟（ActD追踪实验）。RNA免疫共沉淀（RIP）和pull-down实验直接验证了CAR-Tlr4 mRNA相互作用，解释了CAR激动剂下调TLR4蛋白表达的分子基础。

临床转化潜力

六种临床CAR激动剂（DEX、PTN、RES等）均显示肝保护作用，其中DEX使血清IL6水平降低65%。在70%肝切除（PHx）后LPS感染模型中，TCP处理组肝脏再生加速（Ki67⁺细胞增加3倍），肝体比在72小时恢复至正常水平。该研究不仅阐明了CAR在免疫代谢中的新功能，还为脓毒症相关肝损伤提供了靶向巨噬细胞的联合治疗策略。