综述：靶向RNA碱基编辑的治疗应用：机制与进展

这篇综述系统阐述了RNA碱基编辑技术（包括A-to-I、C-to-U、U-to-Ψ和A-to-m6A/m6A-to-A编辑器）的核心组件（如CRISPR-Cas13、ADAR、APOBEC等效应蛋白）及其在纠正疾病相关点突变中的潜力，重点探讨了递送方法（AAV/LNP）和临床前应用案例（如Hurler综合征、囊性纤维化），同时反思了当前面临的挑战（如脱靶效应）和未来发展方向。

　　

1. 引言

CRISPR-Cas9技术自2012年问世以来彻底改变了基因组编辑领域，但永久性基因组改变可能引发不可预测的风险。RNA碱基编辑作为一种可逆且剂量可控的替代方案，通过效应蛋白（如ADAR、APOBEC）和靶向系统（如dCas13）实现单核苷酸精准修饰。与DNA编辑相比，RNA编辑的瞬时性规避了伦理争议，同时克服了siRNA等技术无法修复点突变的局限性。

2. RNA编辑器的靶向系统

当前靶向系统分为三类：

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  RNP系统：以CRISPR-dCas13为主导，其中Cas13j家族（如424 aa的ChiCas13j）因超小尺寸成为AAV递送的理想选择。

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  蛋白质系统：如PUF结构域，可编程识别8-nt RNA序列。

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  RNA系统：如H/ACA box snoRNA，通过内源性机制招募效应蛋白。

3. A-to-I编辑器：从外源到内源ADAR的进化

外源ADAR工具如SNAP-ADAR通过共价连接gRNA与ADAR脱氨酶结构域（DD）实现编辑，而Cas-ADAR（如REPAIRv2）通过dCas13融合ADAR2 DD提升特异性。内源ADAR策略如LEAPER利用环状arRNA招募内源ADAR，编辑效率达80%，而CLUSTER通过G•U摆动配对进一步降低脱靶。

4. C-to-U编辑器：APOBEC的挑战

RESCUE系统通过进化ADAR2 DD实现C-to-U编辑，但伴随A-to-I脱靶。CURE工具改用APOBEC3A，但全局脱靶仍待解决。

5. U-to-Ψ编辑器：无义突变的克星

RESTARTv3通过工程化snoRNA引导DKC1将PTC中的U转化为Ψ，抑制NMD并促进通读，在Hurler综合征模型中恢复12%的IDUA酶活性。

6. A-to-m⁶A/m⁶A-to-A编辑器：表观转录组调控

TRADES系统通过SunTag招募多个ALKBH5实现m⁶A去甲基化，而光控CRISPR-dCas13允许红/远红光循环调控m⁶A修饰。

7. 递送平台：AAV与LNP的博弈

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  AAV：持久表达但容量受限，适用于单剂量治疗（如RESTARTv3）。

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  LNP：可递送大载荷（如SNAP-ADAR），但需多次给药。

8. 治疗应用实例

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  Hurler综合征：LEAPER 2.0通过AAV递送恢复10%的IDUA活性。

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  囊性纤维化：RESTARTv2在CFTR-R553X模型中实现37%的通读效率。

9. 挑战与展望

当前瓶颈包括C-to-U编辑器的低效率、递送的组织特异性不足等。未来或通过深度学习优化gRNA设计、开发诱导型编辑器实现时空控制，推动RNA编辑迈向临床。