TET2/TET3缺失对小鼠CD4+ T细胞TCRα/β受体库多样性的生理与病理影响

本研究通过TCR测序技术揭示了TET2/TET3双敲除（DKO）对小鼠CD4+ T细胞TCRα/β受体库的调控作用，证实胸腺和脾脏中TET缺失未影响初始T细胞多样性，但移植扩增后出现显著寡克隆倾向，为TET蛋白在T细胞免疫监视和淋巴瘤发生中的机制提供了新见解。

　　

Introduction

TET（Ten-Eleven Translocation）蛋白家族作为Fe(II)/α-酮戊二酸依赖的双加氧酶，通过催化5-甲基胞嘧啶（5mC）氧化生成5-羟甲基胞嘧啶（5hmC）等修饰产物，在表观遗传调控中发挥核心作用。在T细胞中，TET2和TET3高表达，其缺失会导致基因组不稳定性和DNA修复缺陷。既往研究已证实TET蛋白在常规T细胞、iNKT细胞及调节性T细胞（Tregs）发育中的关键作用，但对其如何影响T细胞受体（TCR）α/β异源二聚体多样性的机制仍不清楚。

Results and discussion

胸腺CD4单阳性（SP）细胞分析显示，野生型（WT）与Tet2/3 DKO小鼠的TCRα/β库均呈现高度多克隆性，累积比例曲线平缓，表明V(D)J重组过程未受显著影响。流式细胞术进一步验证了TCRVβ亚型的多样性，仅观察到TCRVβ8.1-8.2表达轻微下降和TCRVβ5.1-5.2上升的亚群偏移。

在年轻小鼠脾脏CD4⁺ T细胞中，TET缺失同样未破坏TCR多样性。然而，当Tet2/3 DKO细胞在免疫健全受体小鼠中连续移植扩增后，出现戏剧性变化：TCRα/β库多样性锐减，部分优势克隆占比超80%，且V/J基因片段使用高度集中，尤其TCRVβ13显著富集。这种寡克隆扩增与人类颗粒性T细胞白血病中TCRVβ13.3优势克隆的报道相呼应。

机制上，胸腺发育阶段残留的5hmC可能缓冲了TET缺失对TCR重组的直接影响。而移植后克隆选择可能源于TET缺失导致的干细胞特性增强（如Lgr5⁺干细胞基因上调）或免疫逃逸能力改变。值得注意的是，扩增细胞伴随TCRβ蛋白表达下降和染色体非整倍性增加，与人类外周T细胞淋巴瘤（PTCL-NOS）的基因组特征相似，但缺乏滤泡辅助T细胞（Tfh）表型，提示小鼠模型与人类疾病的差异。

Conclusions

该研究首次系统描绘了TET2/3缺失背景下TCR库的动态演变：生理状态下维持正常多样性，而病理扩增时出现寡克隆优势。这一发现为理解TET突变相关T细胞淋巴瘤的克隆进化提供了重要线索，同时建立的TCR库资源将为免疫监测研究提供参考。未来需通过单细胞多组学进一步解析优势克隆的分子特征及其与干细胞特性的关联。

Methods

实验采用Tet2^-/-Tet3^flx/flxCD4Cre小鼠模型，通过流式分选胸腺CD4 SP（CD24^-）和脾脏CD4⁺（CD25^-aGalCer^-）细胞，使用SMARTer TCRα/β测序技术（Takara）分析受体库。数据分析采用MiXCR软件，统计方法包括Kruskal-Wallis检验和Shannon-Wiener多样性指数计算。移植实验采用CD45.1/45.2异源受体系统，验证了扩增细胞的免疫逃逸能力。