综述：哺乳动物卵母细胞玻璃化冷冻中多种冷冻保护剂的组合应用：系统评价

这篇综述系统评价了哺乳动物卵母细胞玻璃化冷冻（Vitrification）中冷冻保护剂（CPAs）的组合策略，重点分析了乙二醇（EG）、二甲基亚砜（DMSO）等传统CPAs与新型添加剂（如海藻糖、蔗糖）的协同效应。研究指出，EG+DMSO组合可显著提高卵母细胞存活率（86.11%）和成熟率（53.47%），但需平衡渗透压毒性。文章为辅助生殖技术（ART）中卵母细胞冷冻方案优化提供了循证依据。

　　

引言

卵母细胞玻璃化冷冻是辅助生殖技术（ART）和基础研究的关键手段，其核心在于冷冻保护剂（CPAs）的组合优化。传统CPAs如DMSO和EG虽能有效抑制冰晶形成，但高浓度毒性可能损害卵母细胞完整性。近年来，海藻糖（Trehalose）、甘油（Glycerol）等新型添加剂因其稳定细胞膜和降低氧化应激的特性受到关注。

方法

通过系统检索PubMed、Scopus等数据库（2014-2024年），纳入10项研究（7项实验+3项综述），采用CASP工具评估质量。研究涵盖猪、马、骆驼等多物种，聚焦CPAs组合对卵母细胞存活率、成熟率及胚胎发育的影响。

结果

1. 传统CPAs的效能

EG+DMSO组合在骆驼卵母细胞中表现最佳，存活率达86.11%，成熟率53.47%，显著优于单一DMSO组（62.79%存活率）。猪卵母细胞实验中，EG+丙二醇（PG）组合虽提高体外成熟（IVM）后降解率，但未显著影响受精率。

2. 糖类添加剂的协同作用

蔗糖与海藻糖在猪卵母细胞冷冻中效果相当，0.5M蔗糖组可显著提升形态正常卵母细胞比例（P<0.05）。水牛卵母细胞实验显示，含0.5M蔗糖的冷冻液能促进卵丘细胞扩展，改善后续胚胎发育潜力。

3. 钙离子浓度的影响

牛卵母细胞研究表明，冷冻液中钙离子水平与EG/DMSO的协同效应相关。1,2-丙二醇（PrOH）因毒性较高且脱水不完全，导致卵母细胞存活率下降。

讨论

物种特异性差异

骆驼卵母细胞对EG+DMSO的高耐受性可能与其细胞膜脂质组成有关，而猪卵母细胞对PG的适应性提示需定制化方案。

技术挑战

高浓度CPAs可能引发表观遗传改变（如DNA甲基化异常），但相关研究仍有限。此外，冷冻-复苏过程中的渗透压骤变仍是导致细胞损伤的主因。

结论

优化CPAs组合需综合考虑物种差异、发育阶段及毒性阈值。未来研究应探索分子级冷冻保护剂（如纳米材料）及标准化冷冻程序，以提升ART中卵母细胞的长期发育潜能。