健脾滋肾方通过调控DNMT1介导的Foxp3甲基化促进MRL/lpr小鼠Treg/Th17平衡及其在系统性红斑狼疮免疫稳态中的作用研究

本研究揭示了健脾滋肾方（JPZS）通过抑制DNA甲基转移酶1（DNMT1）活性，降低Foxp3基因TSDR区域甲基化水平，从而上调Foxp3表达并恢复调节性T细胞（Treg）与辅助性T细胞17（Th17）平衡的分子机制。实验证实JPZS可剂量依赖性改善MRL/lpr狼疮模型小鼠的血清自身抗体（dsDNA/IgG）、补体C3及炎症因子（IL-17/IFN-γ/TGF-β1）水平，其作用与特异性DNMT1抑制剂DC_517效果相当，为中医药治疗系统性红斑狼疮（SLE）提供了表观遗传学调控新靶点。

　　

引言

系统性红斑狼疮（SLE）作为典型的B细胞驱动自身免疫病，其发病机制与Treg/Th17细胞比例失衡密切相关。传统中医"脾肾亏虚"理论与现代医学发现高度吻合——脾阴虚导致代谢紊乱，肾阴虚引发表观遗传失调，共同加剧Th17介导的炎症反应。健脾滋肾方（JPZS）源自六味地黄丸改良方剂，含黄芪、熟地黄等八味药材，前期临床显示可改善SLE患者免疫指标，但具体分子机制尚未阐明。

材料与方法

研究采用48只雌性MRL/lpr狼疮模型小鼠，设JPZS低中高剂量组（6.305/12.61/25.22 g/kg）、DNMT抑制剂5-aza-CdR组、DNMT1特异性抑制剂DC_517组及模型对照组，8只C57BL/6小鼠作健康对照。通过ELISA检测血清指标，流式细胞术分析脾脏Treg（CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺）和Th17（CD4⁺IL-17A⁺）比例，甲基化特异性PCR测序（MSP）定量Foxp3-TSDR区域10个CpG位点甲基化水平，EpiQuik试剂盒检测CD4⁺T细胞DNMT1/3A/3B酶活性。

研究结果

组分分析

HPLC-MS鉴定出JPZS含16种活性成分：黄芪甲苷（829.25 m/z）、毛蕊花糖苷（623.15 m/z）、槲皮素（301 m/z）等，其中黄芪甲苷可促进Treg分化，熟地黄成分具DNMT抑制活性。

疾病改善效应

JPZS高剂量组显著降低模型小鼠血清dsDNA（降幅52.3%）和IgG（降幅47.8%），提升补体C3（增幅2.1倍），并呈剂量依赖性调节细胞因子谱：促炎因子IL-17/IL-23/IFN-γ分别下降61.2%/58.7%/54.9%，抗炎因子TGF-β1升高3.2倍（均P<0.01）。

免疫平衡调控

流式结果显示JPZS-H组使脾脏Th17比例从模型组14.7%降至6.3%，Treg比例从3.8%升至9.5%（P<0.01）。qPCR证实Foxp3 mRNA表达量恢复至正常组82.4%，同时Th17特征转录因子RORγt下调67.5%。

表观遗传机制

关键发现显示模型组Foxp3-TSDR区域平均甲基化率达78.4%，JPZS-H组降至41.2%（P<0.001），其中CpG1/3/7/9/10位点甲基化显著降低。Western blot显示DNMT1蛋白表达减少63.8%，酶活性检测证实JPZS特异性抑制DNMT1（降幅71.5%）而非DNMT3A/3B。

讨论

本研究首次阐明JPZS通过DNMT1-Foxp3表观调控轴改善SLE的分子机制：

1. 1.

   靶向去甲基化：JPZS类似DC_517特异性抑制DNMT1，解除Foxp3-TSDR的表观遗传沉默，使Treg重建免疫抑制功能；

2. 2.

   多组分协同：黄芪甲苷促进Foxp3转录，熟地黄成分抑制DNMT1，茯苓多糖抑制IL-17，形成"表观遗传-转录调控-细胞因子网络"多级干预；

3. 3.

   转化医学价值：为"健脾滋肾"中医理论提供表观遗传学证据，DNMT1或成SLE治疗新靶点。

结论

JPZS通过抑制DNMT1介导的Foxp3高甲基化，恢复Treg/Th17平衡并改善MRL/lpr小鼠狼疮症状。该研究为中医药免疫调节提供了表观遗传学解释，并为开发基于DNMT1抑制剂的SLE治疗方案奠定基础。