苯巴比妥和泼尼松龙对犬瘟热神经系统症状的影响

《Veterinary Medicine and Science》：Effects of Phenobarbital and Prednisolone on Neurological Signs of Canine Distemper

本研究探讨了苯巴比妥和泼尼松龙对神经型犬瘟热（CD）的治疗效果。纳入35只神经症状患犬，其中25例确诊CDV感染，10例阴性。结果显示，确诊组中仅8%完全恢复，18例死亡（15例自然死亡，3例安乐死），部分病例出现缓解。治疗对控制癫痫有一定效果，但泼尼松龙对神经症状改善有限。研究指出当前治疗方案效果不佳，需进一步探索有效治疗手段。

　　### 介绍与背景

犬瘟热病毒（Canine Distemper Virus, CDV）是一种高度传染性的病毒，属于副粘病毒科的麻疹病毒属，能够引发多种系统的疾病，包括呼吸系统、消化系统、皮肤和神经系统（Beineke et al., 2009）。犬瘟热是仅次于狂犬病的第二大致命犬类病毒性疾病（Latha et al., 2007），其感染通常伴随着严重的临床症状，如抽搐、共济失调、小脑症状、肌肉抽动、视神经受累以及脊髓功能障碍，如下肢瘫痪、四肢瘫痪和四肢瘫痪等（Sarchahi et al., 2022b）。这些神经系统症状通常是严重的、进行性的，并且往往是不可逆的。尽管已经采取了多种治疗手段，但该病的死亡率仍然很高，尤其在易感动物中可达30%至80%，而在某些动物如水貂中甚至可高达100%（Wyllie et al., 2016）。目前的治疗方法主要包括支持性护理、皮质类固醇和抗癫痫药物，但尚未有明确有效的治疗方案（Sykes, 2022）。对于神经系统症状的治疗效果有限，导致许多犬只因预后不良而被安乐死。

虽然疫苗接种在很大程度上减少了犬瘟热的发病率，但该病仍在全球范围内发生，即使是在已接种疫苗的动物中（Feijóo et al., 2021；Sarchahi et al., 2022b）。呼吸系统和消化系统的症状在某些情况下可以得到缓解，但神经系统症状的改善往往较差（Sykes, 2022）。因此，针对犬瘟热神经系统形式的治疗策略仍然是一个重要的研究领域。已有许多研究试图找到有效的治疗方法，但结果并不一致，一些研究显示治疗有效，而另一些则未见显著进展（Teixeira et al., 2009；Bogdanchikova et al., 2016；Liu et al., 2016；Gastelum-Leyva et al., 2022；Sarchahi et al., 2022b）。虽然一些文献提到皮质类固醇和抗癫痫药物可能在某些情况下提供症状缓解，但其效果尚未得到充分验证。因此，本研究旨在探讨苯巴比妥和泼尼松龙在犬瘟热神经系统形式中的治疗效果，并报告35只犬的长期治疗结果。

### 材料与方法

本研究遵循动物研究中动物护理和使用指南，并得到了伊朗马什哈德费尔多西大学伦理委员会的批准（批准编号：IR.UM.REC.1399.120）。研究对象为35只表现出犬瘟热神经系统症状的犬只，包括肌肉抽动、四肢瘫痪、四肢麻痹、小脑（共济失调、运动失调、意向性震颤、眼震、去小脑性僵硬）和前庭（共济失调、头部倾斜、紧转圈、跌倒、眼震和姿势反应障碍）症状，以及局部和全身性抽搐。所有符合纳入标准的犬只都接受了全面的临床评估，尽管主要关注神经系统表现，但也包括了同时表现出神经系统和系统性症状（如消化系统、呼吸系统和皮肤症状）的犬只。然而，为了保持研究对神经系统感染的聚焦，并避免可能的混杂因素，我们排除了仅表现出系统性症状而没有神经系统受累的犬只。此外，有苯巴比妥使用史或曾接受过皮质类固醇治疗的犬只也被排除在研究之外。在研究开始前，所有犬只的主人均签署了知情同意书。

为了确诊犬瘟热，我们对每只犬进行了多项检测，包括全血细胞计数（CBC）、快速诊断试剂盒（Anigen Rapid CDV Ag Test Kit, BioNote, Hwaseong, Korea）检测结膜或脑脊液（CSF）中的病毒抗原，以及逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测血液和/或脑脊液中的病毒RNA。如果任何一项检测结果为阳性，则可确诊犬瘟热感染。此外，我们还尝试将犬瘟热与其他可能引起神经系统症状的疾病区分开来，例如犬细小病毒、食物中毒和有机磷中毒。为了排除犬细小病毒感染，我们对粪便样本进行了犬细小病毒抗原检测。通过详细的临床检查和病史回顾，我们寻找了可能的毒素暴露或污染食物的迹象。同时，我们评估了临床症状的进展和性质，因为犬瘟热通常表现出特征性的症状，如肌肉抽动，而这些症状在其他疾病中较少见。这些全面的诊断步骤有助于确保我们观察到的神经系统症状确实源于犬瘟热感染，而非其他潜在原因。

为了收集脑脊液，我们采用了一种标准化的程序（Sarchahi et al., 2022b）。简要来说，在禁食12小时后，我们放置了颈静脉导管以进行血液采样（使用EDTA管）和静脉注射林格氏液（10 mL/kg/h）。麻醉诱导采用静脉注射（IV）方式，使用克他命（10 mg/kg）和地西泮（1 mg/kg）。在枕颈区域（在寰椎翼和枕骨之间）剃除毛发并用碘伏和70%酒精消毒。使用无菌针头，每10公斤体重收集0.5 mL脑脊液。采集后，动物被允许从麻醉中恢复。我们立即使用快速诊断试剂盒检测脑脊液中的犬瘟热抗原，剩余的脑脊液则在-80°C下冷冻以备后续分析。

对于RT-PCR检测，我们采用了一种标准的实验方法（Sarchahi et al., 2022a）。简要来说，从全血和脑脊液样本中提取RNA，使用商业试剂盒按照制造商的说明进行。提取的RNA用于合成cDNA，随后进行PCR扩增，目标是犬瘟热病毒RNA以及一个管家基因（GAPDH）作为对照。PCR产物的大小符合预期。通过测序验证PCR产物，结果显示出与GenBank数据库中已知犬瘟热病毒序列的高度相似性。测序结果显示出最高的核苷酸相似性与犬瘟热病毒株HL N（GenBank登录号EU489475.1）和犬麻疹病毒株PT61/Pt 2004（GenBank登录号KX774415.1）。这种高同源性验证了检测方法的特异性。本研究中鉴定出的序列已注册在GenBank，登录号分别为MZ707910（PP-I）、MZ798146（PP-II）和MZ802994S（PP-III）。

治疗方案为口服苯巴比妥（2.5 mg/kg）和泼尼松龙（0.55 mg/kg），每12小时一次。泼尼松龙的剂量在2周后减半，1个月后进一步减至四分之一。对于同时表现出神经系统和系统性症状的犬只，除了上述药物外，还给予适当的支持性护理和抗生素。治疗持续到神经系统症状临床缓解或最长3个月，以较早者为准。临床缓解定义为至少连续两周没有神经系统症状。每只犬的康复情况或疾病进展通过每周的电话随访进行监测。

### 结果

在35只表现出犬瘟热神经系统症状的犬中，有25只检测结果为阳性，10只为阴性。阳性组的犬只表现出多种神经系统症状，其中17只（25只中的72%）同时伴有系统性症状，如消化系统、呼吸系统和皮肤症状，而8只（28%）仅表现出神经系统症状。在阳性组中，有2只（8%）表现出显著康复，1只部分康复，1只在随访205天后无明显变化，18只未能康复，其中15只自然死亡，3只因治疗无效而被安乐死。此外，有3只犬的随访结果无法确定。阴性组的10只犬中，8只死亡，1只在随访400天后无明显变化，1只的结局尚不明确。

在阳性组中，仅7只犬（28%）表现出抽搐，其中4只在治疗期间保持无抽搐状态，直到死亡或康复。然而，有3只犬（43%）在抗癫痫治疗期间仍持续抽搐。值得注意的是，有一只犬在治疗期间未出现抽搐，但在死亡时出现了抽搐症状，这表明即使在初始阶段未出现抽搐的犬，也可能在疾病晚期发展出这一症状。这表明抗癫痫药物在管理犬瘟热神经系统症状方面有一定的效果，但并非对所有病例都有效，部分犬可能需要额外的药物或更高的剂量才能达到有效的控制。同时，抽搐作为犬瘟热神经系统形式的典型临床表现，其出现可能反映了疾病进展的严重程度。此外，本研究发现，那些仅表现出肌肉抽动的犬可能有更长的生存期，而那些表现出明显瘫痪的犬则通常病情迅速恶化并死亡。这一现象可能与疾病的进展阶段和免疫系统的反应有关。

在阳性组中，有5只犬的疾病持续时间未知，其余20只的疾病持续时间从2天到586天不等，平均为72 ± 135.2天。中位随访时间为10天（四分位数范围：5.5-90天）。在阴性组中，有1只犬的疾病持续时间未知，其余9只的疾病持续时间从2天到400天不等，平均为59.2 ± 128.3天（p = 0.91）。中位随访时间为14天（四分位数范围：7.5-30天）。在阳性组中，有7只犬仅表现出神经系统症状，而18只表现出神经系统和系统性症状，两组的死亡率相似。值得注意的是，其中一只表现出显著康复的犬仅表现出神经系统症状，而另一只则同时表现出神经系统和系统性症状，它们的随访时间分别为210天和586天，且未出现并发症。这表明在某些情况下，仅表现出神经系统症状的犬可能具有更好的预后。

在阳性组中，有4只犬（16%）曾接受过疫苗接种，其中2只仅表现出神经系统症状，但它们在治疗过程中要么死亡，要么被安乐死。1只表现出神经系统和系统性症状，但仅部分康复，而第4只犬的结局仍不明确。这表明疫苗接种并不能完全防止犬瘟热的发生，尤其是在疾病进展到神经系统阶段时。

### 讨论

犬瘟热是一种严重且通常致命的疾病，尤其在神经系统形式中，其预后较差（Ranjithkumar and Dey, 2021；Sarchahi et al., 2022b）。尽管已有大量研究试图找到有效的治疗方法，但目前尚未有显著提高康复率的方法。许多研究探讨了不同的治疗方案，但大多数报告均未显示高康复率（Teixeira et al., 2009；Bogdanchikova et al., 2016；Liu et al., 2016；Arbabi et al., 2022；Sarchahi et al., 2022b）。这表明犬瘟热的治疗仍面临巨大挑战。

犬瘟热病毒主要通过感染的免疫细胞，尤其是表达信号淋巴细胞活化分子（SLAM）的单核细胞，进入中枢神经系统。这些感染的细胞携带病毒穿过血脑屏障。一旦进入中枢神经系统，病毒通过两种机制导致病变。第一种是直接的病毒效应，包括感染神经元、星形胶质细胞和嗅鞘细胞，导致神经元坏死、嗜酸性包涵体形成和神经吞噬现象。第二种是免疫系统的激活，引发免疫病理反应，表现为脱髓鞘、进行性血管周围单核细胞浸润、星形细胞增生和胶质增生。这些病变的严重程度受病毒株、宿主免疫反应和感染阶段的影响。急性期通常表现为海绵状空泡变性、内皮肿胀和反应性胶质增生，而慢性期则表现为广泛的脱髓鞘和炎症细胞浸润（Beineke et al., 2009；Rudd et al., 2010；Zhao and Ren, 2022）。

因此，在某些新感染的犬中，病毒可以在中枢神经系统中检测到，而在慢性病例中，只有病毒残留效应（直接病毒病变和继发性免疫反应）存在，而中枢神经系统中已无法检测到病毒。这表明在某些情况下，病毒可能在感染后仍然影响神经系统，即使其不再活跃。本研究中，使用皮质类固醇治疗神经系统形式的犬瘟热，但科学证据支持其有效性的研究仍然有限（Sykes, 2022）。Ranjithkumar和Dey的研究指出，皮质类固醇在治疗犬瘟热神经系统形式时并未显示出任何益处（Ranjithkumar and Dey, 2021）。他们的研究包括47例经血清学确诊的神经系统犬瘟热病例，结果显示使用糖皮质激素（如贝他米松）未能阻止疾病从系统性形式向神经系统形式或反之的进展。在7例接受皮质类固醇治疗的病例中，未观察到任何临床改善。这一发现支持了他们的结论，即糖皮质激素治疗在管理神经系统犬瘟热病例中没有临床优势。

在本研究中，仅有2只犬表现出显著的康复，而许多神经系统犬瘟热病例在治疗开始后不久即死亡，或因治疗无效而被安乐死。这表明治疗效果在很大程度上取决于犬只的初始状况。初始状况较差的犬通常对治疗反应不佳，病情迅速恶化，而初始状况较好且食欲良好的犬则能够存活更长时间，治疗效果在这些病例中更为显著。然而，我们也承认，由于严重病例通常在短时间内死亡，我们无法充分评估这些犬只对治疗的反应。这一局限性突显了我们对疾病机制和治疗效果理解的不足，并强调了需要进一步研究的重要性。尽管我们无法在伦理上对严重病例进行更多的研究，但关注初始状况较好的犬只可以为治疗效果提供有价值的见解。这两只表现出显著康复的犬支持了我们的假设，即初始状况在治疗结果中起着关键作用。

在本研究中，有35只犬参与了治疗，其中只有少数表现出抽搐症状。值得注意的是，抽搐是犬瘟热神经系统形式的典型临床表现（Ranjithkumar and Dey, 2021）。我们的研究结果显示抽搐的发生率低于一些先前的报告，这可能表明我们采用的治疗方案在一定程度上对抽搐有一定的管理效果。然而，由于样本量较小且缺乏对照组，我们无法确定这种减少是否直接归因于治疗方案。尽管这些结果令人鼓舞，但需要更大规模的对照研究来确认抗癫痫药物是否能够帮助犬瘟热患者在长期治疗中避免并发症。另一方面，我们的研究显示，抗癫痫药物在那些表现出明显瘫痪的犬中效果有限，导致病情迅速恶化并死亡。然而，仅表现出肌肉抽动的犬可能能够维持更长的生存期。值得注意的是，泼尼松龙在这些犬中的效果有限，仅有8%（2只）表现出康复，这反映了我们研究中较低的成功率。

本研究的一个主要局限性是样本量较小。尽管较大的样本量通常能提供更可靠的结果，但本研究面临一些实际限制，如动物主人的经济负担、动物饲养的困难以及需要进行多项诊断测试。因此，许多患者在研究过程中被排除。此外，许多犬主人在采样和治疗方面缺乏合作，导致部分患者的结局不确定，从而减少了研究的患者数量。这些限制表明，我们需要更深入的研究来验证这些治疗方法的效果，并探索新的治疗策略。尽管本研究中抗癫痫药物对某些病例表现出一定的效果，但总体的康复率较低，尤其是在表现出多种神经系统症状的犬中，这提示当前的治疗手段可能在严重病例中效果有限。

### 结论

本研究为犬瘟热神经系统形式的预后提供了重要信息，但研究样本量较小限制了结论的强度。我们观察到，阳性组中有18只犬（72%）表现出严重的初始病情，未能康复，这表明初始病情的严重程度可能影响预后。在我们有限的样本中，4只表现出抽搐的犬对抗癫痫药物有反应，这提示在某些情况下，抗癫痫治疗可能有效。然而，总体的康复率仅为8%，尤其是在表现出多种神经系统症状的犬中，这表明当前的治疗手段可能在严重病例中效果有限。鉴于这些观察结果和研究的局限性，需要进一步的研究，采用更大的样本量和控制性设计，以评估当前和新的治疗策略对犬瘟热神经系统形式的有效性。此外，还需要探索其他可能的治疗方法，以提高犬瘟热患者的生存率和生活质量。