神经母细胞瘤化疗后免疫功能变化及潜在免疫靶点预测研究

本研究针对儿童神经母细胞瘤化疗耐受性强、疗效难以评估的临床难题，通过尿液蛋白质组学分析联合生物信息学方法，揭示了化疗后CD8+ T细胞介导的免疫抑制状态与mTOR信号通路激活的关联，首次发现SEMA7A蛋白表达抑制与CD8+ T细胞浸润的正相关性，并预测了四氯二苯并二噁英等靶向SEMA7A的化合物，为神经母细胞瘤协同化疗的免疫治疗提供了新靶点。

　　

神经母细胞瘤作为儿童最常见的颅外实体肿瘤，其治疗困境始终牵动着医学界的心弦。尽管多模式联合疗法显著改善了高危患者的生存期，但5年生存率仍低于50%，而化疗带来的骨髓抑制等副作用更让患儿雪上加霜。更令人担忧的是，即便近年来广泛应用的抗GD2免疫疗法，在复发或难治性病例中的应答率仍不尽如人意。这种"疗效天花板"现象促使科学家们思考：是否存在更精准的免疫靶点能与化疗产生协同效应？

北京儿童医院Ma Yunfei团队在《BMC Medical Genomics》发表的研究给出了突破性答案。研究人员创新性地采用尿液蛋白质组学技术，对12例接受CVP方案（顺铂+依托泊苷）化疗的患儿进行动态监测，结合20例健康儿童对照，通过LC-MS/MS质谱分析鉴定出1935种蛋白质。运用ESTIMATE算法和ssGSEA分析揭示化疗后免疫微环境特征，并采用Mfuzz动态表达模型锁定关键靶点。

研究结果呈现三大发现：首先，免疫分析显示化疗7天后免疫评分（ImmuneScore）显著降低，21天后逐渐恢复，其中CD8⁺ T细胞减少是免疫抑制的关键因素。其次，通过差异表达分析和动态聚类，筛选出112个化疗相关差异蛋白，其中mTOR信号通路相关蛋白（如ATP6V1G1、KRAS等）的异常激活尤为突出。最后，研究发现神经母细胞瘤化疗显著抑制SEMA7A表达，该蛋白与CD8⁺ T细胞浸润呈正相关（r=0.62），并通过CTD数据库预测四氯二苯并二噁英等化合物可能靶向调控SEMA7A。

技术方法上，研究团队建立了标准化样本处理流程：采用10,000xg离心去除细胞碎片，25mm硝酸纤维素膜富集蛋白，改良FASP方法消化后，使用Orbitrap Exploris 480质谱仪进行DIA模式检测。数据分析采用Spectronaut Pulsar软件，设置Q值<0.01的严格阈值，并通过KNN算法填补缺失值。免疫分析将3483个免疫相关基因（IRGs）映射至蛋白质组数据，采用GeneMANIA构建蛋白互作网络。

具体研究结果可分为四个维度：

1. 1.

   免疫特征演变：ESTIMATE算法显示化疗7天后免疫评分骤降（P<0.01），21天组部分恢复。CIBERSORT分析证实CD8⁺ T细胞是主要变化亚群。

2. 2.

   通路激活模式：差异蛋白显著富集于mTOR通路（Padj<0.05），其中ATP6V1系列蛋白介导的自噬保护与KRAS驱动的免疫抑制形成"双刃剑"效应。

3. 3.

   关键靶点鉴定：19个差异表达免疫相关蛋白（DEIRPs）中，SEMA7A在化疗后呈现"V型"动态变化，与CD8⁺ T细胞浸润程度显著相关。

4. 4.

   药物预测：CTD数据库筛选出四氯二苯并二噁英等7种可能作用于SEMA7A的化合物，为后续实验提供候选分子。

讨论部分指出，该研究首次建立神经母细胞瘤化疗后尿液蛋白质组图谱，提出mTOR通路双重调控机制假说：化疗早期mTORC1通过ATP6V1促进肿瘤细胞存活，而mTORC2则通过KRAS介导免疫逃逸。SEMA7A的发现尤为关键，既往研究显示其在头颈鳞癌中通过异常糖基化诱导CD8⁺ T细胞耗竭，本研究则揭示其在神经母细胞瘤化疗免疫调控中的新角色。预测化合物四氯二苯并二噁英已知可通过芳香烃受体（AHR）激活调节性T细胞，这为开发联合治疗方案提供思路。

这项研究的创新价值体现在三方面：方法学上开创尿液蛋白质组监测化疗反应的新范式；理论上阐明mTOR通路时空特异性激活机制；临床上为GD2疗法无效患者提供替代靶点。尽管存在样本量有限等局限，但研究提出的"SEMA7A-CD8⁺ T细胞-mTOR"调控轴为神经母细胞瘤精准免疫治疗开辟了新路径，未来可通过类器官模型和多中心队列进一步验证。