基于新型实时荧光RT-qPCR技术的双壳贝类中HEV、HAstV与SaV三重同步检测方法

为解决食源性病原体快速筛查难题，来自河北的研究团队开发了一种以MS2噬菌体为过程对照的四重实时荧光RT-qPCR技术，可同步检测双壳贝类中的戊型肝炎病毒(HEV)、人星状病毒(HAstV)和札如病毒(SaV)。该方法检测限达102-103拷贝/μL，变异系数<3.0%，90分钟内完成检测，在354份样本中检出HEV(9.60%)、HAstV(3.67%)和SaV(6.78%)的混合污染，为食品安全监测提供高效技术支撑。

　　

在食源性疾病防控领域，戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus, HEV)、人星状病毒(Human astrovirus, HAstV)和札如病毒(Sapovirus, SaV)是引发消化道感染的三大元凶。科研团队创新性地建立四重实时逆转录定量PCR(quadruple real-time RT-qPCR)检测体系，巧妙引入MS2噬菌体作为流程内参，实现三种病毒同步追踪。经过参数优化，该方法对HEV、HAstV和MS2的检测灵敏度均达到10³拷贝/μL，SaV更可精准捕捉10²拷贝/μL的微量核酸，批内批间变异系数控制在3.0%以下，全程检测犹如精密计时赛，90分钟内即可冲过终点线。

研究团队从河北省各海域采集354份双壳贝类样本，采用蛋白酶K-PEG 8000沉淀-氯仿抽提的"分子钓鱼"策略富集病毒核酸。检测结果显示，HEV以9.60%的检出率成为最活跃的"潜伏者"，HAstV(3.67%)和SaV(6.78%)则展现出区域性分布特征。更有趣的是，约3.38%样本存在病毒"组团作案"现象，其中HEV与SaV的混合感染率(2.54%)尤为突出。随机抽取200份样本进行方法学验证时，四重检测与单重检测的总体符合率达98.67%，Kappa值0.922的优异表现，证实该技术犹如病毒界的"高清雷达"，为贝类食品安全筑起智能防护网。