视网膜母细胞瘤中MYCN扩增的FISH检测参数与阈值定义：一项提升预后评估精准度的关键研究

本研究针对视网膜母细胞瘤(RB)中MYCN扩增缺乏标准化检测标准的问题，通过系统分析44例临床样本，首次建立了基于荧光原位杂交(FISH)技术的可靠检测体系。研究团队通过回顾性队列验证和前瞻性队列应用，提出以平均基因拷贝数(AVGCN)≥10、MYCN/CEN2比值≥3及MYCN-CEN2差值≥8作为核心参数，成功将MYCN扩增检出率提升至12.1%，为这一侵袭性亚型的精准诊断和个体化治疗提供了重要依据。

　　

视网膜母细胞瘤作为儿童最常见的眼内恶性肿瘤，尽管现代治疗已将生存率提升至95%以上，但MYCN基因扩增亚型仍面临预后差、易转移等临床挑战。这类肿瘤常表现为早发性（平均4.5月龄发病）、组织学未分化等特征，但传统检测方法存在标准不统一、假阴性率高等问题。C. Bielefeld团队在《Virchows Archiv》发表的研究，通过创新性建立FISH检测体系，为破解这一诊断困境提供了关键解决方案。

研究采用44例经病理确诊的视网膜母细胞瘤样本（11例回顾性qPCR验证队列和33例前瞻性验证队列），通过系统文献综述筛选8项潜在FISH参数，最终锁定平均基因拷贝数(AVGCN)、MYCN/CEN2比值和信号差值三大核心指标。借助ZytoLight双色探针技术，对每例样本100个肿瘤细胞进行信号计数，结合SPSS统计分析确定最佳阈值。

定义FISH参数基于回顾性队列分析

通过分析11例已知MYCN扩增样本发现，AVGCN、MYCN/CEN2比值和信号差值变异系数最低（标准差分别为14.2、4.8和13.5）。当计数50个细胞时，91%样本能通过三重阈值（AVGCN≥10、比值≥3、差值≥8）被准确识别，显著优于20细胞计数方案。值得注意的是，一例qPCR阳性样本因肿瘤异质性导致FISH假阴性，提示采样策略的重要性。

前瞻性队列验证临床应用价值

在33例未选择样本中，4例（12.1%）满足全部阳性标准，其AVGCN中位数达25.1（范围17.9-41.9），显著高于阴性组的2.3。研究首次观察到MYCN扩增可与RB1突变共存（3/4阳性病例存在RB1双等位基因失活），颠覆了既往认为两者互斥的认知。

肿瘤异质性与形态学关联

FISH显示MYCN扩增呈现多样化模式：从"粉尘样"密集簇（>50信号/细胞）到清晰可数的局灶扩增（约10信号/细胞）。有趣的是，组织学分化程度与FISH模式无明确关联，未分化区域可能同时存在扩增和非扩增细胞群，这种空间异质性解释了单点采样的局限性。

该研究建立的标准化FISH算法（图4）具有三重创新价值：首先，50细胞计数方案平衡了效率与准确性，适合临床常规应用；其次，三重参数组合可有效区分真性扩增与染色体多体性干扰；最后，12.1%的检出率提示MYCN扩增在晚期RB中可能被既往研究低估。这些发现不仅为RB风险分层提供了新工具，其参数设计思路还可推广至神经母细胞瘤、髓母细胞瘤等MYCN驱动肿瘤的检测标准化。

研究同时指出，未来需在更大队列中验证该标准，并探索MYCN抑制剂与现有疗法的联合策略。作为首个针对RB的MYCN-FISH诊断指南，这项工作为实施"风险适应性治疗"奠定了分子基础，最终有望改善高危患儿的生存质量和长期预后。