PNH克隆在Ph阴性骨髓增殖性肿瘤中的患病率研究：一项揭示CALR与JAK2V617F突变关联的多中心意大利队列分析

本研究针对骨髓增殖性肿瘤（MPN）患者中阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）克隆的患病率展开多中心调查，通过流式细胞术和高通量测序技术，首次揭示CALR与JAK2V617F突变与PNH克隆的潜在关联，为MPN合并溶血性贫血的诊疗提供新视角。

　　

在血液系统疾病领域，骨髓增殖性肿瘤（MPN）和阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）犹如两条看似平行却可能交汇的病理轨迹。MPN以JAK2^V617F、CALR等驱动突变为特征，而PNH则因PIGA基因缺陷导致补体介导的溶血。当患者同时出现贫血、LDH升高和血栓等重叠症状时，临床诊断往往陷入迷雾。更棘手的是，传统认知中PNH克隆主要见于骨髓衰竭综合征，但其在MPN中的流行病学特征和临床意义始终是未解之谜。

这项发表在《Annals of Hematology》的研究由Francesco Lanza团队领衔，联合意大利5家医疗中心，对119例伴有溶血特征的Ph阴性MPN患者展开攻坚。研究人员采用双管齐下的策略：通过标准化流式细胞术检测粒细胞、单核细胞和红细胞上的GPI锚定蛋白缺失，锁定PNH克隆；并运用靶向测序技术（Myeloid Extended Solution panel）解析15例患者（含2例PNH阳性）的基因突变谱。

关键技术方法

研究纳入119例符合WHO 2016诊断标准的MPN患者，采用统一冻干试剂进行高灵敏度流式检测（LOD达0.1%），阳性样本经二次验证并扩展至红细胞分析。对2例PNH阳性和13例阴性病例进行NGS检测，覆盖ATM、STAT5B等髓系相关基因，数据经SOPHiA DDM平台分析（Hg19参考基因组，VAF≥2.5%）。

研究结果

Prevalence of PNH clones

• 在3.23%（3/119）的MPN患者中检出PNH克隆，显著高于既往认知

• 典型案例：1例JAK2^V617F阳性原发性骨髓纤维化（PMF）患者呈现89.8%大克隆伴严重溶血，而CALR突变型PMF患者虽克隆高达92.6%却无显著溶血

Molecular profile of PNH positive patients

• NGS首次在MPN背景下发现X染色体PIGA全外显子缺失（患者#2204）

• CALR突变与PNH克隆共存现象突出（VAF 28.9-35.5%），伴随STAT5B、TET2等次级突变

• 对照组JAK2^V617F突变率达76.9%（10/13），提示不同驱动基因的克隆演化差异

讨论与意义

该研究颠覆性地提出"多基因打击"假说：CALR或JAK2突变可能作为"第一击"赋予造血干细胞增殖优势，而继发PIGA缺陷则推动克隆扩张。这种级联突变模式解释了为何PNH克隆在MPN中虽总体罕见（3.23%），但在特定遗传背景（如CALR突变）下可形成显性克隆。临床启示在于：对伴有无法解释的溶血或血栓的MPN患者，应考虑PNH筛查；而补体抑制剂（如eculizumab）的疗效可能受共存突变影响，如研究中1例大克隆患者对治疗无反应。

未来研究需扩大样本验证CALR-PNH的关联性，并深入探索克隆竞争动力学。这项成果为理解MPN疾病转化提供了新视角，将PNH克隆检测纳入MPN预后评估体系或将成为可能。