基于三相分配与离子交换色谱联用技术纯化地衣芽孢杆菌尿酸酶和蛋白酶的研究

为解决粗酶提取物中尿酸酶和碱性蛋白酶的分离纯化难题，研究人员创新性地采用三相分配(TPP)联合离子交换色谱(IEC)技术。通过优化TPP参数（50%硫酸铵浓度、1:1料液比、pH8.5），使两种酶分别获得5倍和2.7倍纯化，经AKTA start系统自动化IEC进一步纯化达99.99%纯度。该研究首次实现TPP预纯化与自动化IEC联用的双酶同步纯化策略，为工业酶制剂纯化提供新方案。

　　

为探索粗酶提取物的高效纯化路径，科学家们玩起了"分离纯化组合技"——将三相分配(Three Phase Partitioning, TPP)与离子交换色谱(Ion-Exchange Chromatography, IEC)这两大技术进行联合作战。就像精准的分子剪刀手，TPP在最佳参数（50%硫酸铵浓度、1:1料液比、pH8.5）下，将尿酸酶和碱性蛋白酶的纯度分别提升5倍和2.7倍。

真正的黑科技来自全自动AKTA start系统，这个配备电导检测器、紫外检测器和馏分收集器的"蛋白质分离机器人"，通过等度或梯度洗脱程序，最终让两种酶以99.99%的超高纯度亮相，在色谱图上呈现完美的单峰。SDS PAGE电泳如同分子身份证，确证了纯化酶的分子量特征。

生物信息学工具BLASTp还上演了"找亲戚"大戏——地衣芽孢杆菌尿酸酶与枯草芽孢杆菌同源度达87.6%。这项研究开创性地将TPP预纯化与自动化IEC系统结合，就像为酶分子量身定制了"先粗筛再精挑"的两步纯化方案，为工业级酶制剂生产提供了新范式。