新型免疫调节剂Glabridin-Gold(I)复合物通过双重靶向TrxR和MAPK通路协同增强抗肿瘤免疫

这篇研究报道了一种新型金属基免疫调节剂6d，通过将N-杂环卡宾金(I)（NHC-Au(I)）与天然产物光甘草定（GLA）结合，实现了硫氧还蛋白还原酶（TrxR）和丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路的双重抑制。该复合物不仅能增强树突状细胞（DC）成熟和肿瘤免疫原性（ICD效应），还可重塑免疫抑制微环境（抑制MDSCs、Tregs和M2型巨噬细胞），并通过下调PD-L1表达和促进颗粒酶B（GzmB）产生实现协同抗肿瘤效应。

　　

1 引言

肿瘤免疫治疗面临免疫抑制微环境的挑战，金属配合物因其独特的免疫调节特性成为研究热点。传统铂类药物如奥沙利铂（OXA）虽能诱导免疫原性细胞死亡（ICD），但会激活PD-L1表达和髓系来源抑制细胞（MDSCs）募集。金配合物如金诺芬（AF）通过抑制TrxR发挥抗肿瘤作用，但可能激活MAPK通路导致免疫逃逸。光甘草定（GLA）作为甘草活性成分，能抑制MAPK通路并调节巨噬细胞极化。本研究设计了一种新型Glabridin-Gold(I)复合物6d，旨在通过TrxR和MAPK双靶向策略协同增强抗肿瘤免疫。

2 结果与讨论

2.1 设计合成与表征

通过将NHC-Au(I)与GLA通过烷烃链连接，合成了9种双核和2种单核配合物。核磁共振（NMR）和质谱（ESI-MS）证实了结构，HPLC显示纯度>95%。稳定性实验表明，6d在含谷胱甘肽（GSH）的生理环境中比AF更稳定。

2.2 细胞毒性分析

MTT实验显示6d对肝癌细胞（HepG2和Hepa1-6）的IC₅₀为2.54 μM，优于AF（3.54 μM）和OXA（4.08 μM），且对正常肾细胞（293T）毒性较低。结构-活性关系表明，金中心和GLA的协同效应是关键。

2.3 TrxR抑制与氧化应激

6d通过结合TrxR活性位点（CETSA验证）抑制其活性，导致ROS水平升高（DCFH-DA检测）。线粒体膜电位（JC-1检测）和内质网应激（ERS，CHOP蛋白上调）进一步诱导细胞凋亡（Annexin V/PI染色）。

2.4 ICD效应与免疫激活

6d处理后的肝癌细胞释放损伤相关分子模式（DAMPs）：钙网蛋白（CRT）暴露于膜表面，高迁移率族蛋白B1（HMGB1）从细胞核释放，48小时后ATP外排。这些信号促进DC成熟（CD80⁺CD86⁺比例升高），增强抗原呈递。

2.5 MAPK通路抑制与PD-L1下调

分子对接显示6d与MEK1形成6个氢键（结合能-6.324 kcal·mol^-1）。Western blot证实6d抑制MEK1/2和ERK1/2磷酸化，且通过阻断Akt/HIF-1α通路下调PD-L1表达（流式细胞术验证）。

2.6 体内抗肿瘤效果

在Hepa1-6荷瘤小鼠模型中，6d（5 mg·kg^-1）显著抑制肿瘤生长，且不引起体重下降或器官损伤（H&E染色）。免疫组化显示肿瘤组织PD-L1表达降低，同时MDSCs（Gr-1⁺）、Tregs（Foxp3⁺）和M2型巨噬细胞（CD206⁺）浸润减少，而M1型巨噬细胞（CD86⁺）比例增加。

2.7 免疫微环境重塑

6d促进脾脏和肿瘤中DC成熟（CD11c⁺CD80⁺），并增强CD8⁺ T细胞浸润。关键的是，6d组T细胞高表达颗粒酶B（GzmB），而OXA组因免疫抑制微环境未能激活T细胞毒性。

3 结论

6d作为首个同时靶向TrxR和MAPK的金配合物，通过诱导ICD和抑制免疫抑制微环境，实现了抗肿瘤免疫的双重增强。该研究为金属免疫调节剂的设计提供了新范式，即通过整合天然产物与金属中心的多靶点协同作用克服肿瘤免疫抵抗。

4 实验方法

详细合成步骤见支持信息。生物学实验包括：MTT法测细胞活性、TrxR活性检测（DTNB法）、流式细胞术分析免疫细胞亚群、Western blot检测蛋白表达、免疫荧光/组化定位靶分子，以及荷瘤小鼠模型治疗评估。所有数据均通过GraphPad Prism 8分析，显著性标准为*p < 0.05。