从脂肪组织高效分离内皮祖细胞(EPCs)的新策略及其在血管再生医学中的应用潜力

本研究针对内皮祖细胞(EPCs)临床应用的关键瓶颈——分离效率低的问题，开发了从1-2g脂肪组织(AT)中高效分离EPCs的创新方案。通过双重酶解(胶原酶+胰蛋白酶)和CD31磁珠分选技术，研究者从脂肪基质血管组分(SVF-II)中成功获得具有典型"鹅卵石"形态、高表达CD31/VE-Cadherin/vWF等标志物、且保持体外成管和LDL摄取功能的EPCs群体。该成果为血管再生治疗提供了优质的自体细胞来源，发表于《International Journal of Obesity》。

　　

在血管再生医学领域，内皮祖细胞(Endothelial Progenitor Cells, EPCs)因其强大的增殖能力和血管修复潜力被视为"细胞救星"。然而这个"明星细胞"的临床应用却长期面临供给不足的困境——传统从外周血或骨髓获取的方法如同"大海捞针"，不仅细胞数量稀少，还存在免疫排斥风险。脂肪组织(Adipose Tissue, AT)这个人体"能量仓库"的发现改变了这一局面，其丰富的基质血管组分(Stromal Vascular Fraction, SVF)中潜藏着大量EPCs。但现有分离技术需要≥5g组织样本，且操作复杂如同"沙里淘金"，严重制约了临床应用。

意大利巴里大学团队在《International Journal of Obesity》发表的这项研究，犹如为EPCs分离领域注入一剂"强心针"。研究人员另辟蹊径，将常规流程中废弃的未过滤组织块(SVF-II)变废为宝，通过胶原酶-胰蛋白酶序贯消化这个"组合拳"，配合CD31磁珠分选这把"精准镊子"，仅用1-2g脂肪组织就成功捕获高纯度EPCs。这些细胞不仅表达CD31、VE-Cadherin等标志物，还展现出惊人的稳定性——连续传代4代仍保持内皮特性，其成管能力堪比经典的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)。

关键技术包括：1）从肥胖患者腹部手术获取1-2g大网膜/皮下脂肪；2）创新性采用250μm+70μm两级过滤分离SVF-I/SVF-II；3）CD31磁珠分选结合特定培养基培养；4）通过流式细胞术、免疫荧光、qPCR等多维度验证EPC特性；5）Geltrex三维成管实验和乙酰化LDL摄取实验评估功能。

研究结果

Characterization of SVF-I and SVF-II derived cells

流式分析显示SVF-II中CD31⁺细胞比例(9.55%)是SVF-I(4.63%)的2倍，VE-Cadherin⁺细胞更是高达6.98%（SVF-I仅0.72%），证明未过滤组分富含EPCs。

Magnetic microbead-based enrichment based on CD31

CD31⁺细胞仅在SVF-II中形成典型"鹅卵石"样克隆，而SVF-I几乎无此现象，皮下脂肪验证结果一致。

Analysis of endothelial cell markers

CD31⁺细胞高表达vWF、E-selectin、e-NOS等标志物，其mRNA水平甚至超越HUVECs。免疫印迹显示e-NOS蛋白稳定表达至第4代。

Functional characterization

在Geltrex中，CD31⁺细胞形成复杂管网结构，其分支数量与HUVECs相当；乙酰化LDL摄取实验显示强阳性信号，证实其成熟内皮功能。

这项研究犹如打开脂肪组织"宝库"的钥匙，其突破性体现在：1）样本需求降至临床可行范围（1-2g）；2）首创SVF-II回收策略使产量倍增；3）明确CD31⁺群体可稳定传代的特性。这些发现不仅为糖尿病足、心肌缺血等血管病变的细胞治疗铺平道路，更启示脂肪组织可能成为"个性化"再生医学的细胞工厂。未来研究需探索这些EPCs在体