SARS-CoV-2 nsp8蛋白C端结构域在游离状态下呈现熔球态特征及其与nsp7的互作机制研究

本文揭示了SARS-CoV-2复制转录复合体(RTC)关键辅助因子nsp8的结构动态特征：其C端结构域在游离状态下呈现熔球态（molten-globule）特性，而N端结构域保持稳定折叠；通过NMR等生物物理手段证实nsp8存在浓度依赖性二聚/四聚化现象，且与nsp7结合后C端可折叠为确定构象。该研究为冠状病毒RTC组装机制及nsp8靶向药物开发提供了重要结构基础。

　　

【亮点发现】

nsp8的N端结构域具有稳定折叠结构

¹H-¹⁵N TROSY HSQC谱图显示，游离态全长nsp8仅能检测到70/192个预期信号峰，与单独N端结构域谱图叠加证实：仅N端（1-120残基）维持稳定折叠构象，而C端（121-198残基）呈现典型熔球态特征——具有稳定二级结构但三级结构动态变化，这通过氢氘交换实验和甲基谱分析得到验证。

nsp8 C端结构域呈现熔球态关键特征

该结构域同时具备二级结构稳定性和三级结构动态性：1）圆二色谱显示高α螺旋含量；2）疏水残基（Ile/Leu/Val）信号峰显著展宽，提示侧链运动性增强；3）疏水核心暴露于溶剂。这种"半折叠"状态不同于完全无序蛋白，可能与其多重蛋白互作功能相适应。

nsp7结合诱导C端结构域有序化

当加入nsp7后，nsp8甲基谱出现新的尖锐信号峰，化学位移与nsp7-nsp8晶体结构预测值高度吻合。有趣的是，连接两结构域的柔性linker区域（120-130残基）始终保持动态特性，这种"铰链式"构象可能为RTC组装提供结构可塑性。

讨论

不同研究组关于nsp8寡聚态的报告存在差异（160kDa或75kDa），本文通过NMR弛豫和TRACTS实验证实其存在浓度依赖性二聚/四聚化，但未检测到更大寡聚体。熔球态的C端可能通过"构象选择"机制实现与不同伙伴（如nsp7/nsp12/nsp13）的特异性结合，这种结构多态性为开发靶向nsp8的分子降解剂提供了新思路。