流感C型和D型假型病毒的开发与优化：安全高效的抗病毒筛选及血清流行病学研究新工具

本文推荐：本研究成功构建并优化了表达流感C型(ICV)和D型(IDV)血凝素-酯酶融合蛋白(HEF)的慢病毒假型病毒(PVs)，通过人呼吸道胰蛋白酶样(HAT)蛋白酶增强HEF成熟，建立了基于假型病毒的微中和(pMN)试验和酯酶活性检测体系。该技术为ICV/IDV的血清流行病学调查、抗病毒药物筛选提供了安全、可扩展的研究平台，填补了传统培养技术缺陷。

　　

亮点

细胞系培养

人胚肾293T/17(HEK293 T/17)细胞用于转染实验，同时测试猪睾丸(ST)细胞、犬肾(MDCKII)细胞和人肝癌(Huh-7)细胞作为靶细胞。所有细胞系均采用含10%热灭活胎牛血清的高糖DMEM完全培养基培养。

流感C/D型假型病毒生产的优化及假型病毒微中和(pMN)试验评估

采用标准生产流程（表1）转染HEK293 T/17细胞制备ICV和IDV假型病毒，转染48小时后收集病毒颗粒。通过荧光素酶报告系统检测发现，IC_Minnesota和ID_Italy假型病毒在ST细胞中转导效率最高（IC_Minnesota滴度差异显著，p=0.0147），展现优异的靶向性。

讨论

尽管ICV和IDV尚未对公共卫生构成重大威胁，但近期ICV相关住院病例的增加和IDV人类血清学阳性率的上升，凸显了研究其生物学特性的紧迫性。本研究开发的假型病毒系统克服了传统培养技术限制，为探索病毒入侵机制和跨种传播潜力提供了"分子探针"。

基金声明

Kelly da Costa和Nigel J. Temperton获Leyden Labs NL资助，本研究同时得到欧盟NextGenerationEU基金支持（项目号CUP BC63C22000680007）。

利益冲突声明

Emanuele Montomoli作为VisMederi srl创始人兼首席科学官存在利益关联，其他作者声明无竞争利益。

（注：根据要求已去除文献引用标识和图表标注，专业术语保留英文缩写并规范使用上下标）