编码Gc蛋白的mRNA疫苗为发热伴血小板减少综合征病毒提供完全保护

为解决发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)缺乏有效疫苗的问题，研究人员开发了一种编码糖蛋白C(Gc)的mRNA疫苗。该研究通过脂质纳米颗粒(LNP)递送系统，在C57BL/6和IFNAR?/?小鼠中诱导了平衡的TH1/TH2免疫反应，1μg剂量即可提供100%保护力，且抗体被动转移实验证实体液免疫的关键作用。这项发表于《Vaccine》的研究为防控这种死亡率达30%的蜱传疾病提供了新策略。

　　

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发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)是一种由长角血蜱传播的致命病原体，自2009年在中国首次发现以来，已在东亚多国造成超过1.3万例感染，死亡率高达30%。世界卫生组织(WHO)已将其列为具有大流行潜力的重点病原体。尽管SFTSV的糖蛋白Gn和Gc被认为是疫苗开发的理想靶点，但现有疫苗候选物往往难以同时激发强效的体液和细胞免疫应答。更棘手的是，缺乏合适的动物模型——普通小鼠对SFTSV不易感，而常用的人源化小鼠成本高昂，这严重阻碍了疫苗研发进程。

为突破这些瓶颈，中国科学院武汉病毒研究所的Xiaoyu Zhang、Xuekai Zhang等科研团队另辟蹊径，选择病毒融合蛋白Gc作为靶点，利用新兴的mRNA-LNP技术平台，开发了一种创新型疫苗。该研究创新性地采用IFNAR^?/?小鼠（I型干扰素受体缺陷小鼠）作为攻毒模型，这种模型能模拟人类感染特征且成本可控，为疫苗评价提供了重要工具。

研究团队运用了多项关键技术：通过免疫荧光(IFA)和Western blot(WB)验证疫苗的体外表达；采用PNGase F酶切和免疫沉淀分析Gc蛋白的糖基化修饰；通过ELISA和斑点减少中和试验(FRNT)检测抗体应答；利用酶联免疫斑点(ELISpot)评估T细胞反应；建立高内涵成像技术的高通量中和抗体检测方法；最后在IFNAR^?/?小鼠中进行主动免疫和被动血清转移实验，全面评估疫苗保护效果。

3.1 体外表征

研究发现mRNA疫苗表达的Gc蛋白存在两种形式：糖基化的Gc和去糖基化的Gc。经PNGase F处理后Gc条带消失，证实其N-连接糖基化特征。免疫荧光显示Gc主要定位于细胞质，这种正确的亚细胞定位为其免疫原性奠定了基础。

3.2 体液免疫应答

在C57BL/6和IFNAR^?/?小鼠中，1μg剂量即可诱导高滴度Gc特异性IgG（>10³）和中和抗体（FRNT₅₀）。加强免疫后抗体水平提升约100倍，并能维持20周以上。值得注意的是，IgG2a/IgG1比值分析显示疫苗能平衡T_H1/T_H2反应，避免了疫苗增强疾病(VAED)风险。

3.3 T细胞免疫应答

通过48条重叠肽段筛选，鉴定出Gc蛋白上3个优势T细胞表位（aa601-618、729-746、817-834）。ELISpot显示疫苗主要诱导IFN-γ分泌（T_H1型反应），在IFNAR^?/?小鼠中IL-4分泌较少，进一步证实其T_H1偏向性。

3.4-3.5 最小保护剂量与器官保护

令人振奋的是，1μg疫苗即可完全保护IFNAR^?/?小鼠抵抗77,000 LD₅₀的致死攻击。攻毒后第4天，所有疫苗组小鼠的淋巴、脾脏等7种器官均未检出病毒（检测限<10 FFU/g），而对照组器官病毒载量超10⁶ FFU/g。组织病理学显示疫苗组器官结构完整，而对照组出现脾小结减少、肝细胞坏死等典型病变。

3.6 长期免疫保护

疫苗诱导的抗体在6个月后仍保持较高水平。此时进行攻毒，10μg组存活率达100%，1μg组仍有80%保护率，显著高于对照组的全部死亡。血液学检测显示疫苗组血小板和白细胞数量始终维持正常范围。

3.7 被动免疫保护

血清被动转移实验呈现戏剧性结果：接受免疫血清的小鼠存活率达100%，而PBS组全部死亡。这直接证明疫苗诱导的中和抗体足以独立介导保护作用。

这项研究首次证实单一Gc蛋白mRNA疫苗能提供完全保护，其成功关键在于：1）mRNA技术使Gc蛋白保持天然构象和糖基化修饰；2）LNP递送系统增强免疫原性；3）创新的IFNAR^?/?小鼠模型为评价提供可靠平台。研究不仅为SFTSV防控提供了迄今最有效的疫苗候选，其建立的"最小剂量-完全保护"范式更为其他新发传染病疫苗研发提供了重要参考。未来需在大型动物中验证后推进临床转化，这将为应对全球范围内SFTSV的持续扩散提供有力武器。