基于血清SFRP2和RPRM基因甲基化检测的胃癌无创诊断新策略

本研究针对胃癌(GC)早期诊断难题，创新性地筛选SFRP2和RPRM基因甲基化作为血清生物标志物。研究人员通过qMSP技术检测143例样本发现，双基因联合检测在区分胃癌与健康对照时灵敏度达78.79%，特异性达90%，AUC值0.931。该成果为胃癌液体活检提供了高精度检测方案，发表于《Discover Oncology》。

　　

胃癌是全球第五大常见恶性肿瘤，每年导致约76.9万人死亡。现有诊断方法面临严峻挑战：内镜检查依赖操作者经验且具侵入性，传统血清标志物如CEA和CA19-9对早期胃癌的敏感性不足20%。更棘手的是，约80%患者确诊时已属晚期，错失最佳治疗时机。这种临床困境催生了表观遗传学标志物的探索热潮，其中DNA甲基化作为癌症早期事件，在循环游离DNA(cfDNA)中的检测为无创诊断带来曙光。

为突破胃癌早期诊断瓶颈，土耳其研究团队Serap Dede、?a?r? ?akalar等人在《Discover Oncology》发表重要成果。研究创新性地筛选SFRP2和RPRM基因启动子区甲基化作为血清标志物，通过严谨的实验设计证实其诊断价值。该研究不仅建立了高灵敏度的双基因检测体系，更揭示了表观遗传标志物在胃癌筛查中的应用前景。

关键技术方法包括：1) 收集143例临床样本（33例胃癌、30例慢性胃炎和80例健康对照）建立队列；2) 采用QIAamp MinElute ccfDNA Mini Kit提取血清cfDNA；3) 使用EZ DNA甲基化试剂盒进行亚硫酸盐转化；4) 开发定量甲基化特异性PCR(qMSP)检测10个候选基因；5) 通过ROC曲线评估诊断效能，重点分析SFRP2和RPRM组合价值。

3.1 患者特征

研究纳入37例胃癌患者（平均年龄60.41±11.88岁），38例慢性胃炎患者和80例健康对照。胃癌组男性占比78.4%，反映该病性别分布特征。组织样本来自30例胃癌和38例胃炎患者，血清样本覆盖全部队列，为后续分析奠定基础。

3.2 胃癌细胞系甲基化谱

在AGS和MKN45细胞系中，SFRP2、RPRM等9个基因呈现特征性甲基化模式。值得注意的是，SFRP2和RPRM在两种细胞系中均显示强甲基化信号，而hMLH1和CDH1未检测到甲基化，这为后续临床样本分析提供了理论依据。

3.3 胃癌组织甲基化特征

组织检测揭示10个基因甲基化频率30%-96.7%，其中SFRP2甲基化率最高（96.7%）。关键发现是：RPRM在癌与胃炎组织间Ct值差异达9个周期（P<0.0001），SFRP2差异6个周期（P=0.0003），表明这两个基因甲基化水平与胃癌发生显著相关。

3.4 血清甲基化检测突破

聚焦组织结果中甲基化频率最高的5个基因，血清检测显示：SFRP2和RPRM在胃癌组甲基化率分别为71.87%和66.6%，显著高于胃炎组（16.6%和13.3%）和对照组（8.8%和7.5%）。尤为重要的是，这两个基因在血清中仍保持显著Ct值差异（癌vs胃炎：SFRP2差7Ct，RPRM差8Ct），证实其从组织到血清检测的转化可行性。

3.5 诊断效能评估

单个标志物分析显示，SFRP2灵敏度71.88%、特异性91.25%；RPRM相应值为66.67%和92.5%。创新性采用"或"逻辑组合后，灵敏度提升至78.79%，特异性保持90%，AUC达0.931。这种双基因策略有效平衡了敏感性与特异性，较传统标志物性能显著提升。

3.6 临床转化价值

研究特别验证了该检测对早期胃癌（pT1-pT2）的诊断能力，发现早期与晚期肿瘤甲基化水平无显著差异（P=0.3303），表明该方法在早期筛查中具有独特优势。此外，检测仅需8mL外周血，符合临床实用要求。

这项研究通过系统筛选和验证，确立了SFRP2/RPRM甲基化双基因panel作为胃癌无创诊断的高效工具。其创新价值体现在三方面：首先，首次在血清中证实这两个基因甲基化的诊断效能；其次，开发出灵敏度78.79%的联合检测方案；最后，建立了从细胞系到临床样本的完整验证体系。尽管存在样本量有限等局限，但该成果为胃癌早期筛查提供了新思路，其采用的qMSP技术更易于临床转化。未来扩大队列验证后，有望开发成标准化检测试剂盒，改变当前胃癌诊断格局。