玉叶金花清热片通过抑制补体级联反应和C5a/C5aR1轴缓解急性咽炎的机制研究

本研究针对急性咽炎(AP)治疗中抗生素耐药和免疫调节不足等问题，通过多组学技术揭示了传统中药玉叶金花清热片(YYJH)的药效物质基础及作用机制。研究人员采用UPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS鉴定出血中12种入血成分，结合SD大鼠氨水诱导AP模型和LPS刺激的NP69SV40T细胞模型，证实YYJH通过抑制补体经典途径(C1q-C9)和C5a/C5aR1信号轴，下调促炎因子IL-6/TNF-α表达，调节巨噬细胞极化。该研究为中药复方治疗呼吸道炎症提供了分子靶点依据。

　　

急性咽炎(AP)作为上呼吸道常见感染性疾病，临床表现为咽部黏膜充血水肿、炎性细胞浸润等症状。当前治疗主要依赖抗生素和糖皮质激素，但存在耐药性、副作用等问题。传统中药玉叶金花清热片(YYJH)在临床上显示出良好的抗炎效果，但其多组分协同作用机制尚未明确。补体系统作为先天免疫核心效应机制，其异常激活与炎症性疾病密切相关，特别是C5a/C5aR1信号轴通过MAPK/NF-κB通路诱导细胞因子风暴。然而，单一靶点的补体抑制剂可能增加感染风险，这使得多靶点调控的中药复方成为研究热点。

研究采用UPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS技术结合血清药物化学分析鉴定入血成分；建立SD大鼠氨水诱导AP模型和LPS刺激的人鼻咽上皮细胞NP69SV40T炎症模型；整合转录组、蛋白质组和生物信息学分析揭示作用机制；通过ELISA、Western blot等技术验证关键靶点。

主要化学成分和入血成分鉴定

通过高分辨质谱鉴定出YYJH中60种化学成分，包括环烯醚萜苷、胆汁酸等12种入血原型成分，如京尼平苷(geniposide)、穿心莲内酯(andrographolide)等，为后续药效研究奠定物质基础。

YYJH改善AP病理表型

动物实验显示，YYJH高剂量组(972 mg·kg^-1)显著恢复模型大鼠体重，减轻咽黏膜坏死脱落；外周血白细胞计数显示YYJH可降低WBC、NEU等炎性细胞数量；ELISA检测证实其能降低血清IL-6和TNF-α水平。细胞实验表明含药血清可抑制LPS诱导的NP69SV40T细胞炎症因子释放。

多组学揭示调控网络

转录组分析发现AP模型组942个差异基因富集于IL-17/NOD样受体信号通路，而YYJH组2317个差异基因主要调控黏膜修复。蛋白质组显示181个差异蛋白涉及补体途径，YYJH干预后423个差异蛋白显著影响糖代谢和补体调节。关键分子C9在补体终末途径中起核心作用。

抑制补体C5a/C5aR1轴的抗炎机制

Western blot显示YYJH下调补体经典途径关键蛋白C1复合物(C1r/s/qb)及下游C3/C5/C9表达；ELISA检测到C5a和C3a水平降低。免疫荧光证实YYJH减弱C5aR1膜定位信号，同时抑制巨噬细胞标记物F4/80和M1型标记CD86表达，减少促炎因子IFN-γ、IL-1β分泌。

该研究首次系统阐明YYJH通过"病原识别-补体激活-炎症级联"的多层次调控机制：抑制补体级联反应阻断C5a/C5aR1信号转导，调节巨噬细胞向M1型极化，从而减轻黏膜损伤。这不仅为中药复方治疗AP提供科学依据，也为开发靶向补体系统的多组分药物开辟新思路。研究采用的"化学成分-体内外药效-多组学整合"策略，为解析复杂中药体系作用机制提供范式。