基于高内涵成像的多重检测技术：评估化学物质对人类神经祖细胞增殖与凋亡的影响

这篇研究推荐开发了一种384孔板多重检测技术，将原DNT-IVB（发育神经毒性体外测试组合）中独立的hNPC（人类神经祖细胞）增殖（BrdU标记）和凋亡（Caspase-3/7检测）检测整合为高通量自动化方案。该技术显著提升了检测效率（Z-prime>0.5），在315种化学物质筛选中验证了与96孔板检测的高度一致性，为环境毒理学研究提供了革新性工具。

　　

亮点

材料

实验采用5-溴-2'-脱氧尿苷（BrdU，Sigma-Aldrich）标记DNA复制作为增殖指标，并选用CellEvent? Caspase-3/7绿色检测试剂（ThermoFisher）作为凋亡指示剂。所有试剂与设备信息详见补充表S2。

结果

通过系列优化实验（详见补充方法），成功建立基于高内涵成像的384孔板多重检测体系。代表性图像显示，该技术可同步清晰标记BrdU阳性（增殖）和caspase阳性（凋亡）细胞（图1）。

讨论

本研究响应DNT-IVB技术迭代需求，将原96孔板独立检测升级为自动化384孔板多重检测方案。优化后的体系在315种化学物质筛选中表现出卓越性能（Z-prime>0.5），不仅显著提升通量，还能识别更多选择性影响增殖的化合物，为环境神经毒性风险评估提供更高效平台。

基金信息

美国EPA研究开发办公室资助本研究，部分作者通过ORISE项目参与。

作者贡献声明

Gabrielle Byrd主导实验设计、数据分析和论文撰写；Timothy J Shafer提供资源与方法学支持；Joshua A. Harrill负责项目监管与资金获取。

利益冲突声明

作者声明无利益冲突。

致谢

感谢Terri Fairley等提供的技术支持，以及审稿专家的宝贵意见。注：M.C.现任职于美国FDA人类食品项目。

利益冲突

作者确认本文无利益冲突声明。