多克隆扩增功能性肿瘤反应性淋巴细胞浸润胶质母细胞瘤的个体化细胞治疗新策略

本研究针对胶质母细胞瘤(GBM)免疫治疗难题，通过从161例弥漫性胶质瘤患者的超声吸引器(CUSA)乳液中分离CD137+肿瘤反应性TILs(tr-TILs)，成功实现54%的扩增率。研究发现IDH1突变和类固醇累积剂量显著抑制扩增效能，而扩增后的tr-TILs虽呈现耗竭特征，但保留记忆样表型和多克隆TCR，在体外及异种移植模型中均显示特异性抗肿瘤活性。该研究为GBM的个体化免疫治疗提供了突破性方案。

　　

胶质母细胞瘤(GBM)作为最具侵袭性的脑肿瘤，传统放化疗效果有限，尤其对O⁶-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)启动子未甲基化患者更为棘手。尽管肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)疗法在黑色素瘤中取得FDA批准，但GBM的免疫抑制微环境(TME)和低T细胞浸润率长期阻碍其应用。这项发表于《Nature Communications》的研究，通过创新性利用超声吸引器(CUSA)材料，揭示了GBM中功能性TILs的存在及其治疗潜力。

研究团队首先从161例成人弥漫性胶质瘤的CUSA乳液中分离CD137⁺ tr-TILs——CD137作为激活态T细胞的共刺激分子，在GBM微环境中特异性高表达。通过磁珠分选和细胞因子(IL-15/IL-7/IL-21)组合扩增，成功在87例(54%)患者中获得110-3600倍的扩增。值得注意的是，IDH1突变和术前类固醇累积剂量(>178.5mg)被确认为扩增失败的独立预测因素。

关键技术方法

研究采用CUSA材料分离TILs，通过CD137磁珠分选富集肿瘤反应性T细胞，建立体外扩增体系；使用流式细胞术分析表型；通过TCRβ测序评估克隆性；采用自体GBM神经球(GB-NS)共培养和裸鼠颅内移植模型验证抗肿瘤活性；结合7T MRI和免疫组化监测治疗效果。

CD137是富集胶质瘤中tr-TILs的特异性标志物

• CD137在CD8⁺和CD4⁺ TILs中均匀表达，显著高于外周血单核细胞(PBMCs)

• 间叶型GBM神经球高表达CD137，与GlioVis数据库转录组数据一致

• CD137⁺ TILs与自体肿瘤共培养时IFNγ分泌量较CD137^-群体提高3倍

tr-TILs保留祖细胞记忆状态并呈现多克隆TCR

• 扩增后的TILs富含中央记忆(T_cm)和效应记忆(T_em)亚群

• 单细胞分泌组显示多功能性特征，以趋化因子和效应细胞因子为主

• TCRβ测序揭示多克隆性，而IDH1突变样本呈现限制性克隆

tr-TILs对自体肿瘤细胞的特异性杀伤

• 72小时内使间叶型/经典型/前神经型GB-NS数量减少60-80%

• PD-L1阻断抗体增强IFNγ分泌并降低残留肿瘤细胞数

• 在异种移植模型中，5×10⁶ TILs注射使70%小鼠生存期显著延长

GMP转化可行性

优化后的流程可实现临床级生产，快速扩增协议(REP)保持表型稳定性，为ReacTIL临床试验奠定基础。

这项研究突破性地证实：GBM并非完全"冷肿瘤"，其边缘区域存在可扩增的多克隆抗肿瘤T细胞。通过靶向CD137⁺ TILs，研究者建立了可标准化生产的个体化治疗体系，其与PD-1/PD-L1阻断的协同效应为联合治疗提供新思路。该成果不仅为GBM免疫治疗开辟新途径，更为实体瘤TIL疗法拓展了适应症边界。