荧光胆固醇类似物R-Chol：活细胞中游离胆固醇动态的精准示踪剂

本文推荐：研究者开发了新型荧光胆固醇类似物R-Chol，其通过3-OH位标记实现低毒性活细胞示踪。实验证实R-Chol通过内吞作用进入细胞，经晚期内体/溶酶体(Lyso)依赖NPC1蛋白转运至内质网(ER)，在尼曼匹克病C型(NPC1-/-)细胞中异常累积，Rab9过表达可缓解此现象。该探针为胆固醇代谢异常相关疾病研究提供了重要工具。

　　

Highlight

R-Chol通过内吞作用被细胞摄取

CHO细胞在无血清培养基中用5μM R-Chol处理10分钟后，荧光信号迅速出现在质膜，5小时内扩散至胞质和核周区域（图1B）。使用内吞抑制剂（如dynasore阻断网格蛋白）或基因沉默（如敲低Rab5）显著抑制R-Chol内化，表明其依赖经典内吞途径。

R-Chol在NPC1缺陷细胞中的异常累积

在Npc1^-/-CHO细胞中，R-Chol在晚期内体/溶酶体(Lyso)形成明显聚集体，而野生型细胞中呈均匀分布（图2C）。过表达Rab9（调控晚期内体-高尔基体运输的关键蛋白）可使累积减少47%，提示存在NPC1非依赖的胆固醇逃逸通路。

讨论

R-Chol作为新型探针的优势在于：

1. 1.

   低毒性（浓度≤5μM时不影响细胞活力）

2. 2.

   精准模拟游离胆固醇的时空动态

3. 3.

   适用于尼曼匹克病等脂质代谢障碍疾病模型研究。其转运机制揭示：约60%通过NPC1依赖的Lyso-ER途径，其余可能经膜接触位点(MCS)的非囊泡运输完成。

Conclusion

本研究证实R-Chol是研究胆固醇运输机制的理想工具，特别适用于活细胞动态观测。其异常累积表型可作为NPC疾病药物筛选的定量指标，Rab9调控通路的发现为开发旁路治疗策略提供了新思路。