靶向HBV表面抗原表位E183–91/HLA-A*0201的TCR样抗体修饰CAR-T细胞在HBV-HCC治疗中的强效抗肿瘤活性

本研究创新性地利用TCR样抗体修饰的CAR-T细胞靶向HBV表面抗原表位E183–91/HLA-A*0201复合物（E183pHLA），在体外和多种异种移植模型中证实其特异性杀伤HBV相关肝癌（HBV-HCC）的潜力。通过单链三聚体（SCT）技术构建抗原递呈系统，证明该疗法对低表达靶标的肿瘤仍具显著活性，且未观察到严重毒性，为CAR-T治疗病毒相关实体瘤提供了新策略。

　　

引言

肝细胞癌（HCC）作为全球高致死率恶性肿瘤，治疗选择有限，尤其与乙肝病毒（HBV）感染高度相关的HBV-HCC占中国病例90%。尽管嵌合抗原受体T细胞（CAR-T）疗法在血液肿瘤中成效显著，但实体瘤应用受限于靶抗原匮乏。本研究聚焦HBV整合至宿主基因组产生的特异性病毒抗原表位——由HLA-A*0201递呈的HBV包膜表位Env183-191（E183pHLA），该表位在HBV-HCC中广泛存在且具免疫原性。

材料与方法

采用单链三聚体（SCT）技术构建E183–91/HLA-A*0201复合物，稳定转染至肝癌细胞系（PLC/PRF/5、Huh7、SNU449）。从健康供体分离外周血单核细胞（PBMC），经抗CD3/CD28激活后，用携带TCR样抗体scFv的第二代CAR（含CD28/CD3ζ共刺激结构域）的慢病毒转导，制备HBs183 CAR-T细胞。通过流式细胞术、实时细胞分析（RTCA）和酶联免疫吸附试验（ELISA）评估其功能。

结果

特异性杀伤验证：HBs183 CAR-T细胞对肽段脉冲的TAP缺陷型T2细胞呈现剂量依赖性杀伤，20 μg/mL E183肽刺激下IFN-γ分泌量达峰值，而无关流感M1肽无响应。

抗原密度差异下的活性：在SCT修饰的肝癌细胞中，即使低抗原表达（SNU449-E183，36%）仍可诱导显著细胞因子释放（IL-2>500 pg/mL，E:T=10:1）。RTCA显示CAR-T细胞在3小时内即可裂解PLC/PRF/5-E183（抗原阳性率73%）。

体内疗效与安全性：皮下移植PLC/PRF/5-E183 SCT-Luc的小鼠经CAR-T治疗后，肿瘤荧光强度降低80%（p<0.001），中位生存期延长40%。病理学检查显示心、肝等重要器官无炎性浸润或结构损伤。

讨论

本研究首次将病毒衍生的细胞内抗原表位作为CAR-T靶点，突破传统肿瘤表面抗原限制。SCT技术虽能模拟抗原递呈，但需进一步验证患者肿瘤内源性E183pHLA表达异质性。值得注意的是，靶向病毒抗原可避免对正常组织的脱靶毒性，但长期抗肿瘤效能需优化，如引入4-1BB共刺激域或IL-15支持。

结论

HBs183 CAR-T细胞通过TCR样识别机制精准靶向HBV-HCC，为实体瘤治疗提供"内源抗原外靶向"新范式，其临床转化需结合患者HBV整合谱及HLA分型进行个性化设计。