瘦素增强葡萄糖酸锑钠疗效调控巨噬细胞向M1表型极化以清除热带利什曼原虫感染

本研究针对热带利什曼原虫(Leishmania tropica)感染中巨噬细胞极化失衡问题，探索瘦素(leptin)联合葡萄糖酸锑钠(glucantime)的协同作用。通过体外实验证实，瘦素通过上调CD86/iNOS/SOCS3等M1标志物，下调CD206/ARG1/SOCS1等M2标志物，显著增强巨噬细胞的ROS/NO杀伤能力，完全清除胞内无鞭毛体(IC50=2.47 ng/ml)。该发现为降低传统药物毒性、开发免疫调节疗法提供新策略。

　　

研究背景与意义

皮肤利什曼病(CL)作为被忽视的热带病，每年导致全球超百万新发病例，其特征性皮肤溃疡可造成永久性瘢痕与社会心理负担。热带利什曼原虫(Leishmania tropica)是中东等地区的主要病原体，其生存策略依赖于劫持宿主巨噬细胞——这些免疫细胞既可表现为促炎的M1表型(分泌TNF-α/IL-12/IFN-γ)清除寄生虫，也可分化为抑炎的M2表型(高表达IL-10/TGF-β)促进感染扩散。现有治疗药物葡萄糖酸锑钠(glucantime)存在毒性大、耐药性等问题，而脂肪因子瘦素(leptin)在营养不良型内脏利什曼病中显示出免疫调节潜力，但其对巨噬细胞极化的影响尚未阐明。

关键技术方法

研究采用THP-1细胞系诱导分化的巨噬细胞模型，感染L. tropica后分别给予瘦素(5/10 ng/ml)、葡萄糖酸锑钠(100/200 μg/ml)单药或联合处理。通过MTT法测定细胞毒性(CC₅₀)和抗寄生虫活性(IC₅₀)，流式细胞术检测活性氧(ROS)，Griess法分析一氧化氮(NO)。qPCR和ELISA分别检测M1/M2相关标志物(CD86/CD206)、细胞因子(TNF-α/IL-10等)、SOCS分子及miRNA表达，免疫荧光验证蛋白定位。

主要研究结果

1. 药物协同效应与安全性

瘦素与葡萄糖酸锑钠对L. tropica前鞭毛体和无鞭毛体均呈剂量依赖性抑制，联合组IC₅₀(2.47 ng/ml)显著低于单药(瘦素7.81 ng/ml，葡萄糖酸锑钠108.9 μg/ml)。10 ng/ml瘦素+100 μg/ml葡萄糖酸锑钠组合完全清除胞内寄生虫，选择性指数(SI=17.66)优于单药(瘦素SI=7.88，葡萄糖酸锑钠SI=6.87)。

2. 氧化应激调控

联合治疗组ROS产量较单药提升2.1-3.8倍(P<0.0001)，10 ng/ml瘦素使NO分泌量达45.2 μM，显著高于5 ng/ml组(28.7 μM)。iNOS mRNA表达同步上调4.5倍，而M2相关精氨酸酶(ARG1)表达下降72%。

3. 极化标志物动态变化

瘦素剂量依赖性地促进M1表型：

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  CD86/SOCS3/miR-155分别上调3.2/4.1/5.8倍

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  TNF-α/IL-12蛋白分泌增加2.3-3.5倍

  同时抑制M2表型：

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  CD206/SOCS1/miR-146a降低61-78%

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  IL-10/TGF-β分泌减少54-67%

4. 关键信号通路

免疫荧光显示联合组SOCS1(绿色荧光)表达强度降至对照组的29%，而SOCS3(红色荧光)增加4.8倍，表明瘦素通过解除JAK-STAT通路抑制，维持促炎信号持续激活。

结论与展望

该研究首次揭示瘦素通过双重机制增强抗利什曼疗效：直接激活巨噬细胞M1极化，同时阻断SOCS1介导的负反馈循环。10 ng/ml瘦素与100 μg/ml葡萄糖酸锑钠的协同作用尤为突出，其完全清除寄生虫且高安全性的特点，为临床减少锑剂用量、降低肝毒性提供实验依据。未来需在动物模型中验证该方案对慢性感染的组织修复影响，并探索瘦素受体激动剂的开发潜力。论文发表于《Parasites》时，审稿人高度评价其"为代谢-免疫交叉研究开辟了新视角"。