靶向EGFR突变的新型诊疗一体化探针OSA-Cy7的构建及其在非小细胞肺癌中的应用研究

本研究针对EGFR-TKIs（酪氨酸激酶抑制剂）疗效预测的临床难题，开发了基于第三代EGFR-TKI奥希替尼（Osimertinib）的近红外荧光探针OSA-Cy7。该探针通过特异性识别EGFR激活突变（19del/L858R/T790M），实现了对非小细胞肺癌（NSCLC）的分子影像诊断与靶向治疗同步进行，为EGFR突变患者的精准诊疗提供了新型theranostic（诊疗一体化）策略。

　　

肺癌是全球癌症死亡的首要原因，其中非小细胞肺癌（NSCLC）占比超过85%。表皮生长因子受体（EGFR）作为NSCLC的关键驱动基因，其酪氨酸激酶域突变（如19号外显子缺失/19del和L858R）患者对EGFR酪氨酸激酶抑制剂（TKI）治疗敏感。然而临床面临两大困境：一是传统基因检测存在样本获取困难、灵敏度不足等问题；二是约10%携带敏感突变患者对TKI无应答，而部分无突变患者反而获益。更棘手的是，50%以上患者使用第一/二代TKI后会产生T790M耐药突变。第三代TKI奥希替尼虽能克服T790M耐药，但仍缺乏配套的疗效预测工具。

针对这些挑战，Dong Ying团队在《BMC Biotechnology》发表研究，创新性地将奥希替尼与近红外荧光染料Cy7偶联，构建了首个基于第三代TKI的诊疗一体化探针OSA-Cy7。该探针兼具分子影像与靶向治疗双重功能：通过近红外荧光成像可视化EGFR突变状态，同时保留奥希替尼的抗肿瘤活性。

研究采用三步关键技术：1）通过丙烯酸连接臂合成奥希替尼-Cy7偶联物；2）采用CCK-8和克隆形成实验评估抗增殖效应；3）结合Western blot和流式细胞术验证靶向性。实验选用PC9（19del）、H1975（L858R/T790M）和A549（野生型）三种NSCLC细胞系。

选择性靶向突变EGFR细胞系

荧光成像显示，OSA-Cy7在突变型PC9和H1975细胞的摄取量分别是野生型A549细胞的4.3倍和3.8倍（P<0.001）。流式数据证实，突变细胞的平均荧光强度（MFI）较对照组提升5-7倍，而游离Cy7无此选择性。

抗增殖与EGFR磷酸化抑制

CCK-8实验显示OSA-Cy7对突变细胞的IC₅₀与奥希替尼相当（均<1μM），克隆形成率降低70%-85%。Western blot揭示其可剂量依赖性抑制EGFR和AKT磷酸化，但对野生型EGFR无显著影响。

这项研究突破性地实现了第三代TKI疗效预测与治疗的同步化。OSA-Cy7的创新性体现在：1）首次将奥希替尼改造为分子影像探针；2）近红外成像（750/780nm）具备深层组织穿透优势；3）保留不可逆结合Cys797的特性，可监测T790M/C797S耐药突变。尽管需进一步验证体内稳定性，该研究为NSCLC精准医疗提供了新型工具，未来或可应用于术中导航、耐药监测等临床场景。