靶向MDM2/MDMX的双特异性d-肽拮抗剂DPMI-ω通过激活p53通路增强肿瘤免疫治疗

【编辑推荐】针对p53-MDM2/MDMX互作难以靶向的难题，研究者设计出抗蛋白酶解的d-十二肽DPMI-ω，通过金纳米颗粒递送有效激活肿瘤内p53信号通路，联合抗PD1抗体显著抑制B16黑色素瘤生长并扩增CD3+/CD8+T细胞，为免疫治疗耐药肿瘤提供新策略。

　　

在肿瘤治疗领域，p53作为著名的"基因组守护者"，其功能丧失是半数以上癌症发生的共同特征。然而，p53的抑癌活性常被其天然抑制剂MDM2和MDMX（Murine Double Minute 2/X）所阻断，这两个蛋白通过结合p53的转录激活域使其失活。尽管小分子抑制剂如nutlins能阻断MDM2-p53互作，但对MDMX的抑制效果有限，且存在代谢不稳定的问题。更棘手的是，肿瘤微环境中免疫抑制性CD4⁺/CD25⁺调节性T细胞（Treg）的浸润，使得PD1抗体等免疫检查点抑制剂疗效受限——这正是当前肿瘤免疫治疗需要攻克的"高悬之果"。

发表于《Journal of Medical Mycology》的这项研究，创新性地采用全D型氨基酸设计策略，开发出能同时靶向MDM2/MDMX的双特异性肽拮抗剂^DPMI-ω。该十二肽序列EFWYVE^p-ClFEKLLR中，对氯苯丙氨酸(^p-ClF)的引入显著增强了结合亲和力。通过金纳米颗粒载体解决递送难题后，研究者发现该肽能穿透肿瘤细胞，通过竞争性结合MDM2/MDMX的p53结合口袋，重新激活p53依赖的凋亡通路。在B16黑色素瘤模型中，^DPMI-ω单药即能抑制肿瘤生长，与抗PD1联用更产生协同效应——肿瘤浸润CD3⁺/CD8⁺细胞增加3倍的同时，Treg比例下降40%，显著改善免疫抑制微环境。

关键技术包括：1）基于结构设计的D型肽合成与修饰；2）表面等离子共振(SPR)验证MDM2/MDMX结合活性；3）纳米金颗粒载药系统构建；4）流式细胞术分析肿瘤免疫细胞浸润；5）小鼠B16黑色素瘤模型疗效评估。

【结构设计与活性验证】

通过核磁共振解析^DPMI-ω与MDM2复合物结构，发现其对MDM2的亲和力(K_d=36 nM)较天然肽提高20倍，对MDMX也保持纳摩尔级结合。分子对接显示，^p-ClF插入MDM2的Leu54/Leu82疏水口袋形成卤键，这是双特异性结合的关键。

【体外抗肿瘤效应】

在p53野生型肿瘤细胞中，纳米金负载的^DPMI-ω使p21表达上调8倍，caspase-3活性增加5倍。值得注意的是，对MDMX高表达的SJSA-1细胞同样有效，证明其克服MDMX介导耐药的能力。

【免疫调节机制】

联合治疗组肿瘤组织转录组分析显示，干扰素-γ信号通路显著激活。ELISPOT检测证实，特异性IFN-γ分泌T细胞增加2.5倍，且Treg标志物Foxp3表达降低60%，揭示其通过"解除免疫刹车"增强PD1抗体疗效。

这项研究开创性地实现了三个突破：1）首个可同时阻断MDM2/MDMX的D型肽；2）首次证明p53激活剂可重塑肿瘤免疫微环境；3）为肽类药物在联合治疗中的应用提供范式。尤其对于MDMX过表达导致免疫治疗耐药的黑色素瘤患者，^DPMI-ω与PD1抗体的组合策略具有重要转化价值。未来研究可进一步探索其在其他p53野生型实体瘤中的应用潜力。