基于曙红Y荧光猝灭的绿色可持续光谱法测定血浆中比拉斯汀及其药代动力学应用与分子机制研究

本文开发了一种基于曙红Y（eosin Y）荧光猝灭的绿色、高灵敏度光谱法，用于定量血浆中的抗组胺药比拉斯汀（bilastine）。通过紫外-可见光谱和荧光光谱证实了基态复合物形成（静态猝灭，KSV=8.81×105 M?1），结合分子对接揭示了氢键和静电相互作用机制。方法符合ICH M10指南（线性范围0.02–2.0 μg/mL，LOD=6.41 ng/mL），成功应用于药代动力学研究（Cmax=230.4 ng/mL，t1/2=10.23 h），并通过AGREE（0.7）、BAGI（70.0）评估证实其环保优势。

　　

Highlight

本研究创新性地利用曙红Y荧光猝灭效应，建立了血浆中比拉斯汀的高灵敏度检测方法。通过多维度机制解析和绿色化设计，为抗组胺药物的治疗监测提供了可持续分析方案。

Materials and reagents

比拉斯汀标准品（纯度99.7%，CAS 202189-78-4）购自Sigma-Aldrich，曙红Y二钠盐（Acid Red 87）为分析级试剂。实验使用Bilastigec?片剂（20 mg/片）和肝素化人血浆，所有溶液均用超纯水配制。

Spectral characteristics of eosin Y-bilastine complex

紫外光谱显示，比拉斯汀加入后曙红Y在518 nm处吸收峰发生红移（bathochromic shift）并伴随增色效应（hyperchromic effect），荧光发射在545 nm处显著猝灭（图1）。Stern-Volmer分析证实静态猝灭机制，双分子猝灭速率常数K_q远超扩散控制极限（1×10¹⁰ M^?1s^?1），结合Job法确定1:1化学计量比。热力学计算显示自发结合过程（ΔG=?33.9 kJ/mol），量子力学模拟揭示了N-H···O氢键（键长1.89 ?）和π-阳离子相互作用的关键作用。

Conclusion

该方法成功克服传统色谱法有机溶剂消耗大、LC-MS/MS成本高的局限，通过可见光区检测（545 nm）有效避免生物基质干扰。在药代动力学应用中，志愿者数据与文献高度吻合，AGREE评估（0.7）和RGB12白度值（89.7%）突显其绿色分析化学价值，为同类研究提供了创新范式。