磷酸甘露糖变位酶2(PMM2)活性检测新方法在先天性糖基化障碍Ia型(CDG Ia)诊断中的应用价值

本研究针对先天性糖基化障碍Ia型(PMM2-CDG)诊断难题，通过改良Van Schaftingen微光谱法建立PMM2酶活性参考值(6.54-48.02 nmol/h*mg蛋白)，成功检出无残余活性的CDG Ia患儿。该标准化方法显著提升诊断灵敏度，为哥伦比亚首次建立该病酶学诊断体系，对早期识别这一致死性遗传病具有重要意义。

　　

糖基化缺陷的精准诊断突破

在生命活动中，蛋白质糖基化犹如精密的分子"装饰"，决定着蛋白质的结构与功能。当这个环节出错时，就会引发先天性糖基化障碍(CDG)——一组涉及177种表型的遗传性疾病。其中PMM2-CDG（又称CDG Ia型）最为常见，由磷酸甘露糖变位酶2(PMM2)缺陷导致，患儿常表现为小脑萎缩、凝血障碍和多器官衰竭，约20%在2岁前死亡。然而在哥伦比亚，这类疾病长期被误诊为肝硬化等疾病，凸显建立本土化诊断体系的紧迫性。

创新方法破解诊断困境

研究团队创新性改良Van Schaftingen法，通过四步偶联反应建立微光谱检测体系：1）从50名健康志愿者（1.94-26岁）分离白细胞；2）优化反应条件（1 mM M-1-P底物、10 μM G-1,6-BP辅因子）；3）采用NADPH生成速率定量PMM2活性；4）同步检测溶酶体酶GALNS作为质控。关键技术突破包括确定2小时线性反应区间、优化MPI/G6PD酶活比例至2.4:1，使检测灵敏度提升84%。

关键发现揭示诊断标准

样本收集与标准化：建立哥伦比亚首个健康人群PMM2活性参考区间（6.54-48.02 nmol/h*mg蛋白），发现男性活性显著高于女性（27.02 vs 18.43）。

方法学验证：反应混合物在-20°C保存30天仍保持85.2%活性，批间变异系数仅3.7%，显著优于传统方法。

病例诊断：在24日龄疑似患儿中检出PMM2活性完全缺失（0 nmol/hmg蛋白），而GALNS活性正常（12.83 nmol/hmg蛋白），血清芳基硫酸酯酶B活性异常升高7倍，符合CDG Ia特征。

临床转化与机制探讨

该研究首次证实PMM2活性与年龄无关，但发现3个超高活性样本（51.56-60.86 nmol/h*mg蛋白），提示可能存在激活突变。值得注意的是，溶酶体酶活性升高现象与Barone等报道一致，可能是由于糖基化缺陷导致酶分泌异常。研究者建议对确诊患者补充甘露糖治疗前需先进行基因检测，因R141H等严重突变型对治疗无响应。

这项发表于《Clinica Chimica Acta》的研究，不仅为哥伦比亚填补了CDG诊断空白，其建立的微板检测法（仅需100 μg蛋白）更具成本优势。未来可进一步探索PMM2活性性别差异的分子机制，以及溶酶体酶异常升高的病理意义，为开发新型生物标志物提供线索。