中性粒细胞外泌体miR-30d-5p通过调控T/B细胞活化促进系统性红斑狼疮进展的机制研究

本研究揭示了中性粒细胞来源外泌体（exosomes）中miR-30d-5p在系统性红斑狼疮（SLE）中的关键作用。通过MRL/lpr小鼠模型证实，SLE患者中性粒细胞外泌体高表达miR-30d-5p可促进Th17/Tfh细胞分化、B细胞活化及自身抗体（ANA/anti-dsDNA IgG）产生，加剧狼疮肾炎（lupus nephritis）；而miR-30d-5p抑制剂能逆转上述效应，为SLE治疗提供新靶点。

　　

Abstract

系统性红斑狼疮（SLE）是一种累及多器官的慢性自身免疫病，其特征包括致病性T细胞扩增和B细胞过度活化。近年研究发现，中性粒细胞来源的外泌体通过递送microRNA参与SLE进展，但具体机制尚未明确。本研究聚焦miR-30d-5p，揭示其在SLE中性粒细胞外泌体中的调控作用及分子机制。

Background

SLE患者存在显著的T滤泡辅助细胞（Tfh）异常扩增，这些细胞通过促进生发中心（GC）形成和自身抗体产生加剧疾病。中性粒细胞外泌体作为细胞间通讯载体，可携带miRNA调控受体细胞功能。既往报道显示miR-30d-5p在脓毒症急性肾损伤中通过激活NF-κB通路发挥作用，但其在SLE中的角色仍是空白。

Methods

研究纳入10例SLE患者和10例健康对照，分离中性粒细胞后通过超速离心获取外泌体，经透射电镜（TEM）和纳米颗粒追踪分析（NTA）鉴定其形态特征（直径约150nm）。采用MRL/lpr小鼠模型，分组接受PBS、SLE来源外泌体（50μg/kg）或外泌体+miR-30d-5p抑制剂（15nmol/20g）处理，通过以下方法评估效应：

1. 1.

   肾脏病理：HE染色评估淋巴细胞浸润，计算活动指数（0-24分）和慢性指数（0-12分）

2. 2.

   免疫分析：流式检测Th17（IL-17⁺）、Tfh（CXCR5⁺PD-1⁺）、Treg（Foxp3⁺）和B细胞（B220⁺CD19⁺）比例

3. 3.

   血清检测：ELISA定量抗核抗体（ANA）、抗dsDNA IgG及炎症因子（TNF-α/IL-17A等）

Results

关键发现呈现三级证据链：

1. 1.

   临床样本验证：SLE患者中性粒细胞外泌体的miR-30d-5p水平较健康组升高3倍（P<0.001），且外泌体标志物CD63⁺占比达82.3±5.6%。

2. 2.

   动物模型表型：外泌体处理组小鼠出现显著脾肿大（较对照组增大1.8倍）、蛋白尿升高（P<0.01），肾脏活动指数评分增加2.3倍，伴随抗dsDNA IgG水平上升215%（均P<0.01）。

3. 3.

   免疫机制解析：

   • •

     促炎亚群扩增：Th17和Tfh细胞比例分别增加2.1倍和1.7倍（P<0.01）

   • •

     调节性T细胞抑制：Treg比例下降至对照组的53%（P<0.01）

   • •

     B细胞过度活化：B220⁺CD19⁺细胞增加1.9倍（P<0.01）

4. 4.

   干预效果：miR-30d-5p抑制剂使上述指标恢复至接近基线水平，尤其肾脏慢性指数降低62%（P<0.01）。

Discussion

研究提出创新性机制假说：SLE中性粒细胞释放富含miR-30d-5p的外泌体，通过靶向SOCS1/Tsc1等基因解除对JAK-STAT/mTOR通路的抑制，导致Th17/Tfh-B细胞轴过度活化。该发现具有双重意义：

1. 1.

   诊断价值：循环外泌体miR-30d-5p或可作为SLE活动性生物标志物

2. 2.

   治疗潜力：基于外泌体的miRNA靶向递送系统可能突破现有生物制剂（如贝利尤单抗）的局限性

Conclusion

中性粒细胞外泌体miR-30d-5p通过协调适应性免疫应答驱动SLE进展，其抑制剂展现出显著的治疗潜力，为开发精准免疫调节策略提供理论依据。