靶向A35蛋白的人源单克隆抗体为猴痘病毒致死感染提供强效保护

针对2022年猴痘(MPXV)疫情缺乏有效治疗的现状，研究人员从康复者体内分离出三株靶向A35蛋白的高亲和力单克隆抗体(mAbs)。这些抗体通过Fc依赖和非依赖机制中和正痘病毒(orthopoxviruses)，在小鼠模型中完全预防致死感染，并与人类康复者血清中保护性抗体反应高度相关，为下一代正痘病毒治疗奠定基础。

　　

2022年爆发的猴痘疫情让世界再次认识到正痘病毒(orthopoxviruses)的威胁。尽管天花疫苗对猴痘有一定交叉保护作用，但当前使用的JYNNEOS疫苗诱导的抗体反应较弱，且特效药物Tecovirimat在临床试验中表现不佳。更令人担忧的是，猴痘病毒在人际传播过程中出现了APOBEC3介导的适应性突变，这可能导致病毒进一步进化。面对这些挑战，科学家们将目光投向了猴痘病毒表面高度保守的A35蛋白——这个在病毒细胞间传播中起关键作用的包膜蛋白(EV protein)。

为破解这一科学难题，来自美国西奈山伊坎医学院等机构的国际研究团队在《Cell》发表重要成果。研究人员从一名猴痘康复者的1700万外周血单个核细胞(PBMCs)中分离出17个A35特异性记忆B细胞，最终获得三株具有强效中和活性的单克隆抗体EV35-2、EV35-6和EV35-7。研究采用了单细胞V(D)J测序、生物层干涉技术(BLI)、晶体结构解析等关键技术，并建立了小鼠致死模型评估保护效果。

三株人源mAbs高亲和力结合MPXVA35和VACVA33

通过ELISA和BLI检测发现，这三株抗体对猴痘病毒A35蛋白和其牛痘病毒(VACV)同源蛋白A33均具有皮摩尔到纳摩尔级的高亲和力。其中EV35-6和EV35-7对所有测试蛋白的最小结合浓度低至0.001μg/mL，展现出卓越的结合能力。

体外有效抑制正痘病毒传播

在彗星抑制试验中，50μg/mL的三种抗体均能显著减少VACV IHD-J株形成的彗星样斑块。定量分析显示，抗体处理组的斑块数量、长度和宽度均显著降低，表明其能有效阻断病毒细胞间传播。

体内完全保护免受致死感染

在BALB/c小鼠模型中，预防性给予150μg抗体可100%预防VACV WRvFire株致死感染。治疗性给药实验中，EV35-6在感染后24小时给药仍能提供完全保护。更重要的是，这些抗体对猴痘病毒clade IIa同样有效，EV35-6和EV35-7组小鼠全部存活。

独特的表位识别机制

晶体结构解析揭示，三株抗体均靶向A35二聚体形成的沟槽区——一个在正痘病毒中高度保守的表位。其中EV35-2和EV35-7的CDRH3区含有IGHD2-21基因编码的CxGGDCx基序，通过二硫键稳定构象，与A35形成广泛相互作用。这种由D基因决定的抗体识别模式在以往研究中较为罕见。

与临床保护密切相关

竞争ELISA显示，康复者血清中靶向相同表位的抗体水平与更好临床结局显著相关：高竞争组患者症状持续时间更短(平均7.3天 vs 11.6天)，且无人住院。系统水平多变量分析表明，这些表位特异性抗体可能协同作用，产生叠加保护效果。

这项研究具有多重重要意义：首先，首次阐明A35蛋白二聚体沟槽区是一个关键的病毒弱点，为疫苗设计提供了精确靶点；其次，发现IGHD2-21基因编码的保守基序在抗体应答中的重要作用，拓展了对B细胞应答机制的认识；最重要的是，这三株抗体展现出卓越的治疗潜力，其中EV35-6作为预防和治疗制剂都表现突出，有望发展成为应对正痘病毒威胁的"广谱"生物制剂。考虑到A35在正痘病毒中的高度保守性，这些发现不仅对猴痘防治有直接价值，也为应对未来可能出现的其他正痘病毒疫情储备了技术方案。