基于胶体金免疫层析技术的唾液腺苷脱氨酶2（ADA2）快速抗原检测及其在DADA2和胸膜结核诊断中的应用

这篇研究开发了一种新型胶体金免疫层析试纸条（ICS），用于检测生物体液中的腺苷脱氨酶2（ADA2）。该快速抗原检测（RAT）可精准诊断ADA2缺乏症（DADA2），并有望应用于胸膜结核筛查，其灵敏度达0.5 ng/mL，临床特异性达98.3%，为罕见病和感染性疾病提供了便捷的床旁检测（POC）方案。

　　

引言

腺苷脱氨酶2（ADA2）作为腺苷代谢的关键酶，其活性异常与免疫紊乱和癌症密切相关。研究团队此前开发的ELISA法已证实唾液ADA2检测可诊断头颈癌和ADA2缺乏症（DADA2）——一种以血管炎、早发性中风和骨髓衰竭为特征的罕见遗传病。然而，传统检测成本高且依赖专业设备，亟需开发便捷的快速检测技术。

材料与方法

样本来源：9例经Sanger测序确诊的DADA2患者（中位年龄18岁）和59名健康志愿者参与研究。胸膜结核（TB）组纳入41例患者，非TB组48例，样本来自西班牙Lleida大学医院的生物样本库。

关键技术：

1. 1.

   重组ADA2制备：通过慢病毒载体转染293T细胞，经肝素柱和凝胶过滤纯化获得高纯度ADA2蛋白。

2. 2.

   多克隆抗体开发：用重组ADA2免疫家兔，通过生物素化ADA2的链霉亲和素柱纯化特异性抗体。

3. 3.

   试纸条构建：将胶体金标记的ADA2抗体包被于玻璃纤维垫，硝化纤维素膜上喷涂捕获抗体（抗兔IgG）形成检测线，优化后的检测限为0.5 ng/mL。

结果

性能验证：

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  健康人群中58/59例唾液检测阳性（特异性98.3%），而9例DADA2患者均为阴性。

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  稀释实验显示0.6 ng/mL ADA2可产生清晰检测线，低于0.4 ng/mL则无信号，与ELISA结果高度一致。

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  两种采样设计（直接滴样和拭子挤压）结果等效，15分钟内即可判读。

拓展应用：胸膜液750倍稀释后，TB组100%阳性，非TB组假阳性率10.6%，提示其在结核诊断中的潜力。

讨论

该研究首次实现唾液ADA2的即时检测，其优势在于：

1. 1.

   临床便捷性：无需离心或专业设备，适合家庭自测和资源匮乏地区。

2. 2.

   双重诊断价值：既可筛查DADA2（阴性结果），又能识别TB等高ADA2疾病（强阳性信号）。

3. 3.

   技术普适性：胶体金平台易于扩展至其他生物标志物检测。

局限性包括1例健康人假阴性，可能与唾液采集时间或个体差异有关。未来需扩大样本验证TB诊断阈值，并探索在白血病监测中的应用。

结论

ADA2快速抗原检测革新了罕见病和感染性疾病的筛查模式，其非侵入性、低成本和高可靠性特点，为实现"从实验室到家庭"的精准医疗提供了新工具。进一步优化检测灵敏度和多中心验证将推动其临床转化。