评估不同采血部位对绵羊β-羟基丁酸（BHBA）浓度测量的影响：FreeStyle Optium Neo H手持仪器的比较研究

本推荐研究系统评估了FreeStyle Optium Neo H手持仪器在绵羊颈静脉与耳静脉中测量β-羟基丁酸（BHBA）浓度的性能。结果显示，尽管存在一定的系统性和比例误差，该设备在两种采血部位均表现出良好的诊断准确性（AUC > 0.88），优化阈值分别为颈静脉≥0.8 mmol/L和耳静脉≥0.6 mmol/L，可用于高效筛查妊娠毒血症（PT）和高酮血症。

　　

引言

妊娠毒血症（Pregnancy Toxaemia, PT），又称高酮血症、双羔病或酮症，是反刍动物中一种重要的代谢性疾病，尤其在围产期绵羊中发病率高，可导致高达80%的死亡率。其发病高峰通常在妊娠最后两周，此时胎儿生长所需的能量达到顶峰，多胎母羊更容易受到影响。

血液中β-羟基丁酸（β-hydroxybutyric acid, BHBA）浓度升高是诊断PT的关键生物标志物。虽然实验室检测BHBA被视为金标准，但由于其耗时且成本较高，近年来许多研究转向使用便携式手持设备（最初为人糖尿病酮症监测设计）进行现场快速检测。以往研究多使用颈静脉血样本，而关于耳静脉等微创采血方式的研究较少。不同采血部位可能因局部组织代谢差异影响BHBA浓度，因此本研究旨在验证FreeStyle Optium Neo H（FS）在绵羊颈静脉和耳静脉采血中的性能，并评估其诊断高酮血症的准确性。

材料与方法

本研究经穆拉西特克奇曼大学动物实验伦理委员会批准，于2022年5月至2023年11月期间在土耳其德尼兹利省和阿菲永卡拉希萨尔省的五家羊场进行。共纳入175只临床健康的晚期妊娠（n=56）和产后（n=119）母羊，包括卡里亚、科尼亚美利奴和皮尔拉克品种。所有羊每日饲喂约1公斤大麦、小麦混合精料和麦秸，自由饮水。

采血与BHBA测定：

使用FS设备测量颈静脉和耳静脉全血中的BHBA浓度，并以颈静脉血清样本的Randox试剂盒（RX Monaco自动化分析仪）测量结果作为参考方法。具体流程包括：先采集颈静脉血样置于真空采血管中，立即用FS测量；再穿刺耳静脉，直接滴血于FS试纸条上，10秒内读取结果。所有血清样本在-20°C保存，6个月内完成实验室分析。Randox法的原理是基于d-3-羟基丁酸脱氢酶催化BHBA氧化为乙酰乙酸，同时还原NAD+为NADH，通过比色法测定吸光度。

统计方法：

使用MedCalc软件进行数据分析。采用Shapiro–Wilk检验数据正态性，Spearman相关系数评估FS与参考方法的相关性，Bland–Altman分析一致性，Passing–Bablok回归检验系统性和比例偏差。通过ROC曲线确定FS诊断高酮血症（参考阈值≥0.8 mmol/L）的最佳临界值，并计算灵敏度、特异性、阳性预测值（PPV）和阴性预测值（NPV）。Cohen’s kappa系数评估分类一致性，其强度划分为无（0–0.20）、弱（0.21–0.39）、中等（0.40–0.59）、强（0.60–0.79）、极强（0.80–0.90）和几乎完全（>0.90）一致。

结果

描述性统计显示，参考方法（Randox）测得的血清BHBA浓度范围为0.00–2.46 mmol/L（均值0.41，标准差0.25），FS在颈静脉和耳静脉全血中的浓度范围分别为0.00–3.10 mmol/L（均值0.38）和0.10–2.90 mmol/L（均值0.37）。血清BHBA浓度分布见图1。

FS与参考方法的相关性较高：颈静脉样本r=0.84（95% CI: 0.79–0.88），耳静脉样本r=0.81（95% CI: 0.75–0.86）。Bland–Altman分析表明，FS在颈静脉和耳静脉中的测量值分别平均低于参考方法0.03 mmol/L（95% CI: 0.01–0.05）和0.04 mmol/L（95% CI: 0.03–0.06），95%一致性界限内分别包含95.4%和96.4%的差异点（图2）。

Passing–Bablok回归揭示颈静脉样本存在负常数偏差（截距-0.125，95% CI: -0.148至-0.078）和正比例偏差（斜率1.250，95% CI: 1.111–1.304），而耳静脉样本仅显示负常数偏差（截距-0.050，95% CI: -0.089至-0.018），无比例偏差（斜率1.000，95% CI: 0.909–1.111）（表2）。

ROC分析确定FS诊断高酮血症的优化阈值：颈静脉为≥0.8 mmol/L（灵敏度87.5%，特异性97.6%，AUC 0.896），耳静脉为≥0.6 mmol/L（灵敏度87.5%，特异性91.0%，AUC 0.887）。两种采血部位的NPV均高达99%，但PPV较低（颈静脉64%，耳静脉32%），可能与疾病流行率低有关。Cohen’s kappa显示中等至弱一致性（颈静脉κ=0.72，耳静脉κ=0.43）（表3、表4）。

讨论

本研究首次系统评估FS设备在绵羊颈静脉和耳静脉采血中的性能，发现其与参考方法具有高相关性，但存在一定的系统性和比例偏差，尤其在颈静脉样本中更为明显。这一结果与先前在牛和绵羊中使用其他手持酮体仪的研究一致，如Tümer和K?l?n?（2023）报道FS在绵羊中也有类似偏差。

耳静脉采血作为一种微创替代方法，在本研究中表现出与颈静脉相当的诊断准确性，且操作更简便，适合现场应用。然而，FS在两种采血部位均非完美替代参考方法，但其临床误差在Bland–Altman可接受范围内。优化阈值后，FS显示出良好的判别能力（AUC > 0.88），与Pichler等（2014）使用Precision Xtra的研究结果一致。

本研究局限性包括高酮血症流行率低影响PPV，以及未计算中高BHBA浓度下的变异系数。然而，FS的高NPV（99%）显著降低了漏诊风险，使其适用于羊群筛查。

结论

尽管存在一定的常数和比例误差，FreeStyle Optium Neo H手持设备在绵羊颈静脉和耳静脉采血中均表现出可靠的诊断性能，优化阈值后可有效用于高酮血症和妊娠毒血症的现场快速诊断。