长春碱通过P38/MAPK/ATF3信号通路诱导IL-24分泌增强抗PD1免疫治疗黑色素瘤效果的研究

本研究针对黑色素瘤免疫治疗耐药难题，揭示了长春碱(Vin)通过激活P38/MAPK/ATF3信号轴促进IL-24分泌的新机制。研究发现Vin不仅能通过ROS/DNA损伤途径直接抑制肿瘤，还能重塑免疫微环境增强CD8+ T细胞功能，与PD-1抑制剂联用展现协同效应，为克服免疫检查点抑制剂耐药提供了创新策略。

　　

黑色素瘤作为最具侵袭性的皮肤癌症，虽然免疫检查点抑制剂(ICIs)如PD-1/PD-L1抗体已取得突破，但仍有30%-40%患者面临原发耐药或获得性耐药的困境。这种耐药性与肿瘤微环境(TME)中T细胞耗竭、免疫抑制细胞浸润等复杂因素密切相关。如何打破免疫抑制屏障、重振CD8⁺ T细胞的抗肿瘤活性，成为当前研究的焦点。

在这项发表于《Journal of Experimental 》的研究中，Susi Zhu和Xu Zhang等研究者将目光投向天然产物长春碱(Vinburnine)。这种传统用于脑血管疾病的生物碱，通过双重机制展现惊人潜力：一方面直接诱导肿瘤细胞凋亡，另一方面意外激活免疫调节因子IL-24的分泌，为联合免疫治疗带来新曙光。

研究团队运用多组学联用技术，通过RNA-seq揭示Vin处理后的转录组变化，结合Western blot验证关键蛋白表达。建立人源（A375/SK-MEL系列）和鼠源（B16F10）黑色素瘤模型，采用流式细胞术分析免疫细胞浸润，并通过ELISA检测细胞因子分泌。创新性构建Transwell共培养系统评估CD8⁺ T细胞杀伤活性，结合染色质免疫沉淀(ChIP)和双荧光素酶报告基因实验解析ATF3对IL-24的转录调控。

【Vin抑制黑色素瘤进展】

通过CCK-8和克隆形成实验证实Vin以剂量依赖性方式抑制黑色素瘤增殖（IC₅₀≈5μM），动物实验显示20 mg/kg剂量组肿瘤体积减少67%。流式分析揭示Vin显著增加肿瘤内CD8⁺ T细胞浸润（P<0.01），同时降低Treg比例。

【Vin诱导ROS和DNA损伤】

DCFH-DA检测显示5μM Vin使ROS水平升高3.2倍（P<0.001），彗星实验证实DNA损伤指标尾矩增加4.5倍。Western blot显示γH2AX、p-ATM表达上调，伴随凋亡标志物BAX/BCL-2比值升高（P<0.01）。

【P38/MAPK/ATF3/IL-24轴激活】

RNA-seq发现IL-24 mRNA表达上调8.7倍（P<0.001），ELISA检测显示5μM Vin使IL-24分泌量增加6.3倍。P38抑制剂SB203580可阻断ATF3核转位（降低72%），ChIP实验证实ATF3直接结合IL-24启动子区-158bp位点。

【免疫协同效应机制】

共培养实验显示Vin处理的肿瘤细胞使CD8⁺ T细胞IFN-γ⁺比例从18%升至43%（P<0.001）。抗IL-20R2抗体会消除这种激活效应，而重组IL-24可模拟Vin作用。动物实验证实Vin+抗PD-1组肿瘤体积较单药组减少58%（P<0.001），且CD8⁺ T细胞浸润增加2.1倍。

这项研究首次阐明长春碱通过P38/MAPK/ATF3通路诱导IL-24分泌的双重抗肿瘤机制：直接引起肿瘤细胞DNA损伤和凋亡，间接激活CD8⁺ T细胞功能。临床意义在于：①为天然产物联合免疫治疗提供范例，Vin可使PD-1抑制剂响应率提升；②发现IL-24/IL-20R2轴是增强T细胞功能的新靶点；③ATF3作为连接表观遗传调控与免疫激活的关键节点分子。研究数据提示，高IL-24表达患者对PD-1治疗响应更佳（HR=0.62），为临床筛选获益人群提供潜在标志物。