长链非编码RNA CRNDE通过稳定SIRT1蛋白调控多发性骨髓瘤中Hedgehog信号通路的机制研究

本研究揭示了长链非编码RNA CRNDE在多发性骨髓瘤(MM)中的关键作用机制。研究人员通过高通量筛选技术鉴定出CRNDE与去乙酰化酶SIRT1的直接相互作用，证实CRNDE通过抑制SIRT1泛素化降解来稳定其蛋白水平，进而激活Hedgehog(Hh)信号通路，促进MM细胞存活、肿瘤干细胞特性及耐药性。该发现为MM靶向治疗提供了新的分子靶点，发表于《Leukemia》杂志。

　　

多发性骨髓瘤(MM)是一种恶性浆细胞肿瘤，占血液系统恶性肿瘤的10%，尽管治疗手段不断进步，但患者5年生存率仅60%且极易复发。这种临床异质性提示除已知遗传突变外，表观遗传调控可能发挥重要作用。近年来，长链非编码RNA(lncRNA)被证实参与MM发生发展，其中结直肠肿瘤差异表达基因(CRNDE)在MM患者中显著高表达并与不良预后相关，但其具体作用机制尚未阐明。

为揭示CRNDE的分子机制，Simone Zocchi等研究团队在《Leukemia》发表的研究中，首先采用创新性lncPRINT高通量筛选技术，在HEK293T报告系统中对约3000种蛋白质进行检测，发现CRNDE与NAD⁺依赖性去乙酰化酶SIRT1存在特异性相互作用。RNA免疫共沉淀(RIP)实验在MM细胞系KMS11和RPMI-8226中验证了这一相互作用。

关键实验技术包括：1) lncPRINT高通量筛选鉴定RNA-蛋白质相互作用；2) CRISPR-Cas9构建CRNDE基因敲除细胞模型；3) 蛋白质印迹和实时定量PCR分析基因表达；4) 免疫共沉淀检测蛋白质泛素化；5) 染色质免疫沉淀(ChIP)分析转录因子结合；6) NSG小鼠异种移植模型评估肿瘤发生；7) ALDEFLUOR流式分析和克隆形成实验检测肿瘤干细胞特性。

CRNDE稳定SIRT1蛋白在MM细胞中的作用

通过CRISPR构建的CRNDE敲除(CRNDE^Δ/Δ)KMS11细胞显示，SIRT1蛋白水平显著降低而mRNA不变，且泛素化水平增加。回补实验证实外源CRNDE可恢复SIRT1蛋白表达。在体实验显示CRNDE^Δ/Δ肿瘤对SIRT1抑制剂EX527更敏感，证实CRNDE通过稳定SIRT1促进肿瘤生长。

CRNDE影响MM细胞中促生存的Hedgehog信号通路

CRNDE缺失导致Hh通路靶基因PTCH1、GLI1和HHIP表达下调，且GLI2在启动子区的结合减少。功能实验显示CRNDE^Δ/Δ细胞对地塞米松和硼替佐米更敏感，这种效应可被SIRT1激活剂或重组SHH蛋白部分逆转。TCGA数据分析显示CRNDE高表达与Hh信号激活呈正相关。

CRNDE促进MM肿瘤干细胞样特性的维持

CRNDE缺失导致ALDH⁺干细胞样细胞比例降低和克隆形成能力减弱。SIRT1激活剂SRT1720或延长SHH刺激可部分恢复CRNDE^Δ/Δ细胞的克隆形成能力，表明CRNDE通过SIRT1/Hh轴维持肿瘤干细胞特性。

该研究首次阐明CRNDE-SIRT1-Hh信号轴在MM中的调控机制：CRNDE通过直接结合并抑制SIRT1泛素化降解，维持SIRT1蛋白稳定性，进而激活Hh信号通路促进肿瘤干细胞特性和药物抵抗。这一发现不仅解释了MM临床异质性的部分分子基础，还为联合靶向CRNDE和Hh通路的新型治疗策略提供了理论依据。鉴于CRNDE在多种癌症中高表达，这一机制可能具有更广泛的肿瘤学意义。