综述：大气压质谱成像中后电离策略的应用

本文推荐一种创新的CLIP-TaqMan PCR技术，通过捕获-连接探针与通用TaqMan扩增结合，实现无需RNA提取的SARS-CoV-2高灵敏度检测（LOD 99拷贝/mL）。该ELISA式工作流程显著提升检测通量，对老年及基础疾病人群的早期筛查具有重要价值。

　　

Abstract

尽管COVID-19大流行已趋缓，SARS-CoV-2仍对老年及基础疾病人群构成威胁。传统RT-qPCR因核酸提取步骤存在灵敏度受限（仅2-10 μL RNA投入扩增）、通量低等缺陷。CLIP-TaqMan技术通过三步革新实现突破：

Objectives

开发免提取的病毒RNA直接检测方案，解决现有方法在劳动强度、成本及灵敏度（88-99%）上的局限性。

Method

核心技术包含：

1. 1.

   捕获阶段：采用多尾探针（CEs/LEs）通过三明治杂交将粗样本中RNA固定于寡核苷酸偶联板

2. 2.

   连接阶段：相邻探针经T4 DNA连接酶共价结合形成单链模板

3. 3.

   扩增阶段：通用引物与TaqMan探针（靶向尾序列）实现qPCR信号放大

Results

• 灵敏度达99 copies/mL，较商品化试剂盒多检出4例阳性（46例临床样本验证）

• 特异性良好，可同步检测人类ACTB内参基因

Significance

该技术具备三大优势：

1. 1.

   超灵敏性：避免提取损耗，直接捕获完整RNA

2. 2.

   高通量：96孔板操作兼容自动化，通量提升10倍

3. 3.

   低成本：省去核酸提取试剂（节省$3-5/样本）

Discussion

研究揭示SARS-CoV-2可抑制宿主先天免疫（尤其老年群体），凸显早期筛查必要性。CLIP-TaqMan的ELISA式操作模式为资源有限地区提供可行方案，其模块化设计还可拓展至其他呼吸道病毒（如流感、RSV）的多联检开发。

技术亮点

• 独创"捕获-连接-扩增"三阶段设计，突破传统RT-qPCR瓶颈

• 采用硫代磷酸化修饰探针（提高核酸酶抗性）

• 通用引物体系降低试剂开发成本

该工作由中国医学科学院基础医学研究所团队完成，获国家科技重大专项（2018ZX10101001）等基金支持，相关技术已申请专利保护。