靶向降解HPV致癌蛋白E6降低宫颈癌肿瘤负荷的PROTAC技术研究

针对HPV相关癌症缺乏靶向治疗的现状，研究人员开发了靶向HPV16 E6蛋白的PROTACE6降解剂，通过DNA疫苗递送系统实现局部表达，在免疫健全小鼠模型中显著降低肿瘤负荷，并证实其抗肿瘤效应依赖CD4+/CD8+ T细胞免疫应答，为HPV特异性治疗开辟新途径。

　　

人乳头瘤病毒（HPV）持续感染导致的宫颈癌等恶性肿瘤，至今仍是全球公共卫生重大挑战。尽管预防性疫苗已取得显著成效，但针对已发病患者的特异性治疗手段仍属空白。HPV病毒通过E6和E7两种致癌蛋白劫持宿主细胞机制，其中E6蛋白通过降解p53等抑癌因子促进肿瘤发生，还能干扰免疫识别，堪称病毒阵营的"双面特工"。传统化疗和放疗缺乏特异性，而靶向E6的小分子抑制剂又面临结合力不足的困境。如何精准摧毁这个"肿瘤指挥官"并唤醒机体免疫防御，成为研究者们攻坚的核心命题。

美国H. Lee Moffitt癌症研究中心的Tracess B. Smalley团队在《Molecular Therapy》发表的研究中，巧妙融合了蛋白降解靶向嵌合体（PROTAC）技术与DNA疫苗平台，构建出新型抗肿瘤武器。研究首先从纳米抗体库中筛选出HPV16 E6特异性结合体A5，将其与Von Hippel Lindau（VHL）蛋白连接形成PROTAC^E6，通过CRL2^VHL E3泛素连接酶系统标记E6蛋白进行降解。采用DNA疫苗载体实现病变部位局部表达，在TC-1宫颈癌小鼠模型中评估疗效，并通过免疫细胞耗竭实验解析机制。

E6特异性纳米抗体的开发与验证

研究人员通过免疫羊驼获得靶向HPV16 E6的纳米抗体库，其中A5表现出最佳结合特性。晶体结构分析揭示A5通过互补决定区与E6的α-螺旋结构域形成关键氢键，这种特异性相互作用为后续PROTAC设计奠定基础。

PROTAC^E6的构建与降解机制解析

将A5纳米抗体与VHL配体通过优化后的连接子融合，构建的PROTAC^E6可使E6蛋白水平降低80%。突变拯救实验证实，破坏VHL-E3连接酶复合物或泛素化系统均会阻断降解效应，验证了CRL2^VHL依赖的蛋白酶体降解途径。

DNA疫苗递送系统的治疗优势

相比重组蛋白或病毒载体，采用质粒DNA递送PROTAC^E6编码序列具有显著成本优势。电穿孔辅助的病灶内注射使转染效率提升3倍，局部表达有效避免全身毒性，且载体本身可刺激局部免疫细胞浸润。

肿瘤抑制与免疫协同效应

在HPV⁺肿瘤模型中，PROTAC^E6治疗组肿瘤体积缩小67%。CD4⁺或CD8⁺ T细胞耗竭实验显示，缺失任一种T细胞亚群都会完全消除治疗效果，流式细胞术检测发现治疗组肿瘤微环境中效应T细胞比例增加2.5倍，证实免疫系统参与是疗效的关键环节。

这项研究开创性地将PROTAC技术与免疫治疗策略相结合，突破性地实现三大目标：一是首次证实E6蛋白降解可解除其对p53通路的抑制；二是揭示E6降解暴露的病毒抗原可重新激活免疫监视；三是建立DNA疫苗平台递送PROTAC的标准化方案。该策略不仅为HPV相关癌症提供精准治疗新选择，更为其他病毒致癌蛋白靶向治疗提供范式参考。值得注意的是，DNA疫苗产生的持久PROTAC表达可能解决传统PROTAC半衰期短的瓶颈，这种"一石三鸟"的设计理念展现出广阔的临床转化前景。