基于注射泵-长光程毛细管流动池联用技术的海水中纳摩尔至微摩尔级磷酸盐与亚硝酸盐同步检测方法

这篇研究通过开发线性化质粒DNA标准物质(RM)，采用数字PCR(dPCR)和单分子直接计数两种正交方法，在亚洲标准物质协作组织(ACRM)框架下实现了SI可溯源的拷贝数浓度定值。研究证实了三国国家计量院(NIM/KRISS/NMIJ)测量结果的等效性(En<1)，并制备了104 copies/μL次级标准物质(CRM)，发现不同dPCR平台间存在高达10.5%的检测差异，凸显了SI溯源标准物质对确保核酸绝对定量可比性的重要性。

　　

亮点

本研究开发的线性化质粒DNA标准物质可作为多通道dPCR系统验证的通用标准，其SI可溯源的特性为核酸绝对定量提供了计量学保障。

研究设计

我们合成了一段440 bp的DNA片段，包含4个经优化的dPCR检测靶序列，将其克隆至pBR322质粒并经EcoR I线性化处理。最终获得的线性化质粒长度为4,764 bp（序列信息详见附录1）。

高浓度标准物质的均一性评估

随机选取50瓶样品中的6瓶进行检测，结果显示瓶间相对标准偏差为3.2%（图2）。通过四重靶标同步验证，证实该标准物质适用于多荧光通道dPCR系统的全面性能评估。

结论

虽然dPCR已被视为DNA定量的潜在基准方法，但必须使用具有SI可溯源证书的标准物质(CRM)进行验证。本研究在ACRM框架下通过dPCR和单分子直接计数方法对线性化质粒DNA标准物质进行了系统表征，三国实验室的等效性验证(En<1)为国际互认提供了技术基础。