靶向二代测序揭示斯洛伐克人群膀胱尿路上皮癌的分子特征及临床意义

本研究通过靶向二代测序(NGS)技术，对36例斯洛伐克膀胱尿路上皮癌(UBC)患者的25个相关基因进行检测，发现FGFR3(47.2%)、TSC1(16.7%)、PIK3CA(16.7%)和TP53(13.9%)等关键基因突变与肿瘤侵袭性和分级显著相关，并首次报道了KDM6A等基因的7个新变异，为东欧人群UBC的分子诊断和靶向治疗提供重要依据。

　　

膀胱癌是全球第九大常见恶性肿瘤，每年新增病例约60万例，其中尿路上皮癌(UBC)占90%。这种疾病存在明显的性别差异，男性发病率是女性的3-4倍，且随年龄增长而升高。在斯洛伐克，男性标准化发病率为18.4/10万，女性为5.3/10万。临床上根据浸润深度分为非肌层浸润性膀胱癌(NMIBC)和肌层浸润性膀胱癌(MIBC)，两者的治疗策略截然不同。然而，现有治疗方案如卡介苗(BCG)免疫治疗和新辅助化疗(NAC)存在明显局限性——约60%接受NAC的MIBC患者会出现毒性反应，甚至延误有效治疗时机。

这种治疗困境的根源在于UBC的高度异质性。近年研究已鉴定出多个分子亚型：NMIBC至少存在4种亚型，差异表现在尿路上皮蛋白和角蛋白表达以及FGFR3、KDM6A等基因突变；MIBC则可分为6种共识亚型，包括luminal papillary(LumP)、basal/squamous等，各亚型对治疗的反应和预后差异显著。然而，现有分子数据主要来自北美和西欧人群，中东欧患者在这些全球性研究(如TCGA和UROMOL)中代表性不足。这种地域差异可能导致重要分子特征的遗漏，这正是Lucia Neuschlova团队开展此项研究的初衷。

研究人员采用靶向二代测序技术，对36例斯洛伐克UBC患者的肿瘤组织和配对血液样本进行检测。样本来自布拉迪斯拉发大学医院泌尿科2023-2024年的手术病例，经病理确诊并获伦理批准。使用Agilent SureSelect Cancer Bladder Assay Probes panel覆盖25个UBC相关基因，在Illumina MiniSeq平台测序，平均深度肿瘤样本183×、血液样本63×。通过多软件联合分析，严格筛选致病性变异(VAF≥5%，血液VAF≤0.05%)，并参照ACMG指南进行临床分级。

3.1 Targeted NGS Reveals Genetic Alterations in Multiple UBC-Associated Genes

在36例肿瘤样本中，25例(69.4%)检出致病性变异，共48个。FGFR3突变率最高(47.2%)，其次是TSC1和PIK3CA(各16.7%)、TP53(13.9%)。按临床意义分级：33.3%为Tier I(均为FGFR3突变)，22.9%为Tier II(如PIK3CA E542K)，44.8%为Tier III(意义未明变异)。

3.2 Frequent UBC-Associated Variants Also Found in Slovak Patients

FGFR3突变与早期分期(TIS/pTa/pT1)显著相关(p<0.05)，在非浸润性(37.8% vs 13.6%)和低级别肿瘤中更常见；而TP53突变则与浸润性(18.2% vs 2.7%)和高级别肿瘤显著相关(p<0.05)，凸显两者作为不同生物学行为的分子标志价值。

3.3 Molecular Screening Reveals the Occurrence of Rare Variants

发现7个未在ClinVar记录的变异：KDM6A D1032Rfs8/W1064/A1160Sfs32、ARID1A S261/K1808、TSC1 K70和CDKN1A K75Qfs*14。这些截短突变可能导致蛋白功能丧失，经OncoKB预测具有潜在致癌性。

这项研究首次系统描绘了斯洛伐克UBC患者的分子图谱，验证了FGFR3-TP53"二元对立"的突变模式在全球人群中的普适性。特别值得注意的是，虽然未发现地域特异性突变谱，但检测到的多个新型截短变异拓展了对肿瘤抑制基因(KDM6A、ARID1A等)突变多样性的认知。临床转化方面，47.2%的FGFR3突变率提示当地近半数患者可能受益于erdafitinib等靶向药物，而TP53突变则可作为侵袭性肿瘤的预警标志。局限性在于样本量较小和测序深度不足导致的变异漏检，未来需要更大规模的全基因组研究验证这些发现。这项成果为中东欧地区的UBC精准医疗奠定了基础，也为理解肿瘤抑制基因的突变模式提供了新线索。