柑橘CsDREB1B-1通过调控CsNCED1-1表达与ABA生物合成影响溃疡病抗性的分子机制

本研究针对柑橘溃疡病（Xanthomonas citri subsp. citri, Xcc）抗性机制不明的问题，通过构建CsDREB1B-1过表达和RNAi沉默转基因柑橘，结合Y1H、EMSA和双荧光素酶实验，发现CsDREB1B-1通过直接激活CsNCED1-1启动子促进ABA积累，抑制水杨酸（SA）介导的防御反应，从而降低溃疡病抗性。该研究为柑橘抗病育种提供了新靶点和理论依据。

　　

柑橘溃疡病是由Xanthomonas citri subsp. citri（Xcc）引起的全球性病害，每年造成巨大经济损失。尽管已知植物激素脱落酸（ABA）和水杨酸（SA）在抗病中起拮抗作用，但调控ABA合成的上游转录因子及其分子机制尚不明确。这项发表在《Horticultural Plant Journal》的研究，首次揭示了CsDREB1B-1通过直接调控CsNCED1-1表达影响ABA-SA平衡，从而决定柑橘对溃疡病敏感性的关键机制。

研究人员采用农杆菌介导的遗传转化构建CsDREB1B-1过表达（OE）和RNA干扰（RNAi）转基因柑橘，结合病原菌接种实验评估表型。通过酵母单杂交（Y1H）、电泳迁移率变动分析（EMSA）和双荧光素酶报告系统验证蛋白-DNA互作，并利用ELISA测定激素含量。实验材料选用易感品种"晚锦橙"（Citrus sinensis）和抗病品种"金弹"（Fortunella crassifolia）。

3.1 CsDREB1B-1响应Xcc感染的表达动态

在易感品种晚锦橙中，Xcc感染显著诱导CsDREB1B-1表达，而抗病品种金弹则呈现下调趋势，暗示其可能作为"感病基因"发挥作用。

3.2-3.3 转基因植株的构建与表征

35S启动子驱动的CsDREB1B-1过表达导致植株矮化、叶片皱缩，改用Xcc诱导型PPP1启动子后成功获得正常表型转基因株系。RNAi株系中CsDREB1B-1表达降低48.76%-57.51%。

3.4-3.5 溃疡病抗性评估

RNAi植株病斑面积减少42.26%-55.93%，病原菌CFU显著降低；而PPP1:CsDREB1B-1过表达株系病斑扩大9.27%-33.42%，证实CsDREB1B-1负调控抗性。

3.6 CsDREB1B-1直接激活CsNCED1-1转录

通过Y1H和EMSA证实CsDREB1B-1特异性结合CsNCED1-1启动子的CRT元件（GTCGGT），双荧光素酶实验显示其使报告基因活性提升9.25-63.17倍。

3.7 激素调控网络分析

RNAi植株ABA含量降低60.84%，SA水平提升1.05-3.46倍；过表达株系则呈现相反趋势。qPCR显示SA合成基因CsICS和CsPAL1-1表达同步变化，证实ABA-SA拮抗。

这项研究构建了"Xcc-CsDREB1B-1-CsNCED1-1-ABA-SA"的完整调控通路：病原菌感染诱导CsDREB1B-1表达，通过激活CsNCED1-1促进ABA积累，进而抑制SA防御途径。创新性地采用Xcc诱导型启动子克服了组成型过表达的生长缺陷，为DREB转录因子的功能研究提供了新策略。研究成果不仅阐明了柑橘溃疡病感病的分子机制，更为抗病品种选育提供了CsDREB1B-1这一关键靶点，对实现柑橘绿色防控具有重要实践价值。