环状RNA相关ceRNA网络在宫腔粘连中的鉴定与实验验证：揭示子宫内膜纤维化的分子机制

本研究通过RNA测序和生物信息学分析，首次构建了宫腔粘连（IUA）中环状RNA（circRNA）-微小RNA（miRNA）-信使RNA（mRNA）的竞争性内源RNA（ceRNA）调控网络，鉴定出44个差异表达circRNA和640个差异mRNA。实验验证发现hsa_circ_0000994通过调控TGF-β1/α-SMA/COL1A1通路促进子宫内膜纤维化，为IUA的分子机制研究和靶向治疗提供新思路。

　　

1 引言

宫腔粘连（IUA）是子宫内膜损伤后纤维化导致的生殖障碍疾病，临床表现为月经减少、不孕和流产风险增加。尽管宫腔粘连分离术是主要治疗手段，但严重病例术后复发率高达62.5%，妊娠率仅22.5%-33.3%。近年研究发现，非编码RNA（包括circRNA、lncRNA和miRNA）在纤维化疾病中起关键作用。circRNA因其稳定的环状结构和组织特异性表达，可作为miRNA海绵参与竞争性内源RNA（ceRNA）网络调控。然而，circRNA在IUA中的作用尚未阐明。

2 材料与方法

研究纳入3例IUA患者和3例正常对照（NC）的子宫内膜组织，通过RNA测序和GSE165321数据集分析差异表达谱。采用DESeq2筛选差异基因（|log2FC|>1且p<0.05），使用Cytoscape构建ceRNA网络。通过STRING数据库分析蛋白互作网络，RT-qPCR验证关键circRNA表达。体外实验用TGF-β1诱导人子宫内膜基质细胞（HESCs）纤维化模型，siRNA沉默circRNA后检测α-SMA和COL1A1表达。

3 结果

3.1 差异表达谱分析

共鉴定44个差异circRNA（37上调/7下调）、41个miRNA（20上调/21下调）和640个mRNA（147上调/493下调）。热图显示组间差异显著，验证了数据的可靠性。

3.2 功能富集分析

差异mRNA显著富集于细胞外基质（ECM）结构、胶原纤维组装等生物学过程。KEGG分析提示NF-κB、Notch和Toll样受体信号通路参与IUA发展。

3.3 ceRNA网络构建

筛选出16个circRNA、14个miRNA和49个mRNA构建网络，其中hsa_circ_0000994和hsa_circ_0000439为核心节点。蛋白互作网络发现SRSF11、PAPOLA等10个枢纽基因。

3.4 实验验证

RT-qPCR证实hsa_circ_0000994和hsa_circ_0000439在IUA组织中表达显著上调（p<0.05）。体外沉默hsa_circ_0000994后，TGF-β1诱导的α-SMA和COL1A1表达明显下降（p<0.05），提示其通过调控纤维化标志物参与IUA进程。

4 讨论

本研究首次揭示circRNA在IUA中的调控网络，发现hsa_circ_0000994可能通过下游靶基因LIMS1和KMO影响ECM沉积。NF-κB和Notch通路的激活进一步促进TGF-β1介导的纤维化。尽管样本量限制需后续扩大验证，但hsa_circ_0000994的促纤维化作用为其作为治疗靶点提供了实验依据。

5 结论

hsa_circ_0000994通过ceRNA机制调控子宫内膜纤维化， circRNA-miRNA-mRNA网络的解析为开发IUA的新型诊断标志物和靶向治疗策略奠定理论基础。