miR-34b-5p通过调控BRD4/TP53轴在三阴性乳腺癌中的促癌作用及治疗抵抗机制

（编辑推荐）本研究揭示miR-34b-5p在三阴性乳腺癌（TNBC）中通过上调BRD4表达促进肿瘤进展的分子机制。实验证明，miR-34b-5p在TP53突变型MDA-MB-231细胞中显著增强BRD4/突变p53轴活性，导致JQ1（BRD4抑制剂）治疗抵抗；而在TP53野生型MCF-7细胞中则呈现抑癌效应。该发现为TNBC靶向治疗提供了新的分子分型依据。

　　

1. 引言

miR-34家族成员作为重要的肿瘤抑制因子，通过调控TP53、NOTCH1等信号通路参与癌症进展。然而近期研究发现，miR-34b在三阴性乳腺癌（TNBC）患者中呈现促癌特性，与不良预后显著相关。本研究聚焦BRD4——一种能识别组蛋白乙酰化修饰的表观遗传阅读器，其在TNBC中过表达且与TP53突变存在功能互作。通过比较TP53突变型（MDA-MB-231）与野生型（MCF-7）乳腺癌细胞，探讨miR-34b对BRD4抑制敏感性的调控机制。

2. 材料与方法

实验采用DNA-fectamine转染miR-34b-5p模拟物（序列：5′-UAGGCAGUGUCAUUAGCUGAUUG-3′），通过qRT-PCR检测基因表达（引物见表2），MTT法分析细胞活力，流式细胞术检测凋亡（annexin V/PI双染），划痕实验评估迁移能力。JQ1处理浓度梯度为1-15μM，数据经GraphPad Prism 9.5.1统计分析。

3. 结果

3.1 基因表达调控

在MDA-MB-231细胞中，miR-34b过表达使BRD4 mRNA水平提升2.1倍（p<0.0001），突变型TP53表达同步增加；而MCF-7细胞则出现TP53表达下调（p<0.05）。c-MYC表达在两组均无显著变化。

3.2 治疗抵抗现象

5μM JQ1处理使野生型MCF-7细胞凋亡率升至60%，但对转染后的MDA-MB-231细胞仅诱导16%凋亡（p<0.01）。Western blot显示转染组BRD4蛋白抵抗JQ1的降解作用。

3.3 迁移能力异质性

划痕实验显示，miR-34b转染24小时后，MCF-7细胞迁移抑制率达75%，而MDA-MB-231细胞在48小时完全恢复迁移能力。JQ1与miR-34b联用对TNBC细胞的协同抑制效率仅为ER⁺细胞的1/3。

4. 讨论

本研究首次揭示miR-34b在TNBC中通过BRD4/mutant TP53正反馈环路发挥促癌作用：

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  表观遗传层面：BRD4通过乙酰化阅读功能稳定突变p53蛋白

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  转录调控层面：突变p53反式激活BRD4启动子

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  治疗抵抗层面：该环路削弱JQ1对BRD4的抑制作用

5. 结论

miR-34b在TNBC中呈现"双重人格"特性，其临床转化需结合TP53突变状态进行精准分型。针对BRD4/miR-34b/TP53轴的联合靶向策略可能成为TNBC治疗新方向。