蟾毒灵通过阻断EGFR介导的RAS-RAF-MEK-ERK通路抑制肝细胞癌进展的机制研究

本研究针对肝细胞癌(HCC)治疗困境，通过临床回顾性队列分析和多维度实验验证，揭示蟾毒配质(Bufalin, BF)作为华蟾素活性成分的抗癌机制。研究人员发现华蟾素联合西医治疗可改善HCC患者生存期，并通过网络药理学、分子对接及体内外实验证实BF通过靶向EGFR-GRB2节点抑制RAS-RAF-MEK-ERK信号通路，为中药抗HCC提供新靶点和理论依据。

　　

肝细胞癌(HCC)作为原发性肝癌的主要亚型，占全球癌症相关死亡的第三位，其治疗面临巨大挑战。尽管手术切除和靶向治疗取得进展，但晚期HCC患者的5年生存率仍不足20%。华蟾素作为传统中药制剂，在临床实践中显示出抗肿瘤潜力，但其核心活性成分蟾毒配质(Bufalin, BF)的作用机制尚未完全阐明。这项发表在《Journal of Experimental & Clinical Cancer Research》的研究，通过整合临床数据与基础研究，系统揭示了BF抗HCC的分子机制。

研究采用临床回顾性队列分析(来自成都中医药大学附属医院2018-2023年患者数据)、网络药理学预测、分子对接验证、组织微阵列分析、细胞功能实验(CCK-8、克隆形成、流式细胞术)和两种小鼠模型(皮下/原位移植瘤)，全面评估BF的抗HCC效果。

临床数据揭示治疗趋势

通过倾向评分匹配分析46例西医治疗与84例联合华蟾素治疗的HCC患者，发现联合组呈现生存改善趋势(5年OS 7.14% vs 4.35%)，且用药时间与疗效呈正相关。这为后续机制研究提供了临床依据。

网络药理学锁定关键靶点

筛选出BF与HCC的124个交集基因，构建蛋白互作网络确定SRC、EGFR、GRB2等15个核心靶点。分子 docking显示BF与EGFR(-7.7 kcal/mol)和GRB2(-8.5 kcal/mol)具有高亲和力，组织微阵列证实这两种蛋白在HCC组织中显著高表达。

体外实验验证抗癌机制

BF以浓度依赖性方式抑制HepG2和HCCLM3细胞活力(IC₅₀约100nM)，诱导凋亡(200nM时达79.73%)。Western blot显示BF显著降低p-EGFR、p-RAF、p-MEK1/2和p-ERK1/2表达，免疫荧光证实其对信号通路的空间抑制。EGFR过表达实验进一步验证BF通过该通路发挥作用的特异性。

动物模型确认治疗效果

在C57BL/6小鼠皮下模型中，BF(1.5mg/kg)抑制肿瘤体积达67.8%，效果媲美索拉非尼。BALB/c裸鼠原位模型显示BF降低生物发光信号强度83.4%。组织学分析显示肿瘤分化改善和Ki67表达下降，血清AFP水平显著降低。

分子机制深度解析

肿瘤组织Western blot和免疫组化显示BF剂量依赖性抑制EGFR磷酸化及下游RAS-RAF-MEK-ERK级联反应。这种多节点阻断特点使其克服了单靶点抑制剂的局限性。

该研究首次系统阐明BF通过EGFR-GRB2轴抑制RAS-RAF-MEK-ERK通路的分子机制，为中药抗HCC提供了科学依据。特别值得注意的是，BF能同时抑制受体酪氨酸激酶(EGFR)和衔接蛋白(GRB2)，这种双靶点作用模式可能解决当前靶向药物的耐药问题。研究创新性地将临床观察与基础研究相结合，不仅证实华蟾素的临床价值，更为开发新型多靶点抗HCC药物奠定了理论基础。未来需开展多中心临床试验优化给药方案，并探索BF与免疫治疗的协同效应。