基于UPLC-QqQ-MS/MS技术的葡萄糖苷键精准鉴定方法建立及其在寡糖/多糖结构解析中的应用

【编辑推荐】本研究创新性地建立了UPLC-QqQ-MS/MS（超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱）结合多重反应监测（MRM）的葡萄糖苷键分析策略。通过阴离子重构结合部分甲基化和PMP衍生化技术，成功构建16种葡萄糖苷键标准品库，解决了传统GC-MS（气相色谱-质谱）对酸性多糖分析的技术瓶颈，为复杂聚糖结构-活性关系研究提供了新方法学支持。

　　

Highlight

我们开发了基于UPLC-QqQ-MS/MS（超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱）与三重四极杆串联质谱联用的糖苷键精准分析策略。本研究详细阐述了靶向鉴定糖苷键的系统性质谱方案，分析流程如图1所示（以葡萄糖苷键为例）。通过化学修饰单糖构建糖苷键数据库，例如：

Results and Discussion

通过阴离子重排（NaH-DMSO体系）结合部分甲基化策略，成功制备了16种葡萄糖苷键标准品。在MRM（多重反应监测）模式下，乳糖、麦芽糖和纤维素中的1-4-Glc（1→4葡萄糖苷键）展现出完全一致的保留时间及特征碎片离子（m/z 187→127），与合成的1-4-Glc标准品完美匹配。有趣的是，麦芽糖和黑曲霉二糖中的T-Glc（末端葡萄糖基）呈现独特的"指纹"质谱图，而黑曲霉二糖中的1-3-Glc（1→3葡萄糖苷键）则产生显著不同的二级质谱裂解模式（m/z 201→141）。葡聚糖中的1-6-Glc（1→6葡萄糖苷键）通过特征离子对（m/z 229→169）实现精准捕获，这些发现为复杂多糖拓扑结构解析提供了分子层面的"解码器"。

Conclusion

本研究建立的LC-MS（液相色谱-质谱）策略可准确鉴定寡糖/多糖中葡萄糖苷键构型（如1-4-、1-3-、1-6-Glc及T-Glc）。通过标准品与模型化合物（乳糖、麦芽糖、黑曲霉二糖、α-葡聚糖和纤维素）的保留时间及特征碎片离子匹配，证实该方法能同时实现定性和定量分析，突破了传统GC-MS（气相色谱-质谱）对酸性多糖的分析限制，为功能性多糖的构效关系研究开辟了新途径。