Wnt5a基因缺失的M1型骨髓源性巨噬细胞通过抑制肝祖细胞中Wnt5a/Frizzled 2轴减轻肝纤维化

本研究针对肝纤维化治疗中巨噬细胞调控机制不明的难题，通过构建Wnt5a基因敲除的M1型骨髓源性巨噬细胞（M1-BMDMs），揭示了其通过阻断Wnt5a/Fzd2信号轴抑制肝祖细胞（HPCs）向胆管上皮细胞（BECs）分化的新机制。实验证实M1-BMDMsWnt5a-KD较未修饰组显著减轻CCl4/2-AAF诱导的大鼠肝硬化，为靶向巨噬细胞-HPCs互作的抗纤维化治疗提供新策略。

　　

肝纤维化作为慢性肝病的终末阶段，目前缺乏有效治疗手段。虽然骨髓源性巨噬细胞(BMDMs)移植显示出抗纤维化潜力，但其调控肝祖细胞(HPCs)分化的分子机制尚不明确。尤其令人困惑的是，具有抗纤维化作用的M1型BMDMs(M1-BMDMs)与促纤维化因子Wnt5a之间的功能矛盾亟待解析。

为破解这一难题，Fei-fei Xing?、Dan-yang Wang?等研究者开展了一项创新性研究。他们发现乙肝相关肝纤维化患者组织中Wnt5a表达随纤维化程度(METAVIR分级)递增，提示其可能成为治疗靶点。通过构建CCl₄/2-AAF诱导的大鼠肝硬化模型，研究团队采用基因编辑技术获得Wnt5a敲除(M1-BMDMs^Wnt5a-KD)和过表达(M1-BMDMs^Wnt5a-OE)的M1-BMDMs进行静脉移植，同时使用CCR2抑制剂阻断外周巨噬细胞募集。体外实验则采用WB-F344肝祖细胞系，通过条件培养基共培养体系揭示细胞间对话机制。

关键技术方法

1. 1.

   流式细胞术鉴定BMDMs表面标志物(CD45/CD68/CD11b)

2. 2.

   慢病毒载体构建Wnt5a/Fzd2基因修饰细胞系

3. 3.

   免疫组化/免疫荧光检测肝组织DR标志物(CK7/CK19/EpCam/Sox9)

4. 4.

   患者肝活检样本的Wnt5a表达分析(METAVIR分级)

5. 5.

   血清生化指标(ALT/AST/TBIL)和羟脯氨酸含量检测

M1-BMDMs^Wnt5a-KD缓解肝硬化进展

通过H&E和天狼星红染色证实，M1-BMDMs^Wnt5a-KD组较对照组显著改善肝组织炎症和胶原沉积。机制上，该组CD68⁺巨噬细胞浸润减少，同时HSCs活化标志物α-SMA和促纤维化因子TGF-β1表达降低。值得注意的是，免疫共定位显示该组OV6⁺/CK19⁺双阳性细胞减少49.1%，证实其抑制HPCs向BECs分化的能力。

Wnt5a/Fzd2轴介导细胞互作

患者组织分析显示Wnt5a/Fzd2表达与纤维化程度正相关。在体外实验中，来自M1-BMDMs^Wnt5a-KD的条件培养基(CM^Wnt5a-KD)使WB-F344细胞的胆管分化标志物CK19表达降低，而Fzd2过表达可逆转此效应。相反，M1-BMDMs^Wnt5a-OE通过激活该信号轴促进HPCs向BECs分化，形成促纤维化正反馈。

研究结论与意义

该研究首次阐明M1-BMDMs中Wnt5a水平通过Fzd2受体调控HPCs命运决定的分子机制，提出"巨噬细胞-HPCs"轴在肝纤维化中的核心作用。临床转化方面，Wnt5a缺陷型M1-BMDMs展现出优于天然M1-BMDMs的治疗效果，为开发精准化细胞疗法提供理论依据。论文发表于《Cell》系列期刊，为肝硬化治疗提供了新的靶向策略。