CDKN2A作为肝细胞癌预后生物标志物的系统分析：铜死亡相关基因的免疫调控机制与临床意义

本研究针对肝细胞癌(HCC)预后评估难题，通过系统分析10个铜死亡相关基因(CRGs)在HCC中的表达特征，发现CDKN2A在肿瘤组织中显著高表达且与不良预后相关。研究结合TCGA和GEO数据库的多组学分析，证实CDKN2A通过调控细胞周期和免疫微环境（特别是树突状细胞和CD8+T细胞浸润）影响HCC进展，并构建了整合CDKN2A表达的预后列线图。该成果为HCC的免疫治疗提供了新靶点，发表于《Discover Oncology》。

　　

肝细胞癌(HCC)是全球第五大常见恶性肿瘤，每年导致60万例死亡，五年生存率仅约20%。尽管免疫检查点抑制剂(ICIs)和分子靶向药物取得进展，但晚期HCC仍面临早期诊断率低、治疗耐药和复发率高等挑战。2022年新发现的铜死亡(cuproptosis)机制——铜离子通过结合三羧酸循环(TCA)中的脂酰化蛋白诱发细胞死亡——为肿瘤研究开辟了新视角。然而，铜死亡相关基因(CRGs)在HCC中的表达模式和作用机制尚不明确。

浙江大学医学院附属邵逸夫医院梁潇团队聚焦细胞周期抑制基因CDKN2A（编码p16蛋白），该基因在多种癌症中具有双重调控作用，但其在HCC中的免疫调控功能尚未阐明。研究人员假设CDKN2A可能通过干扰铜代谢和免疫微环境影响HCC进展，这为开发新型预后标志物提供了理论依据。

研究采用多数据库整合分析策略，主要技术方法包括：1) 从TCGA和GEO数据库获取424例HCC样本的转录组和临床数据；2) 使用CIBERSORT和TIMER算法分析免疫细胞浸润特征；3) 通过GO/KEGG/GSEA进行功能富集；4) 构建包含CDKN2A的预后列线图；5) 采用20对HCC组织芯片进行免疫组化验证。

CDKN2A在肝癌组织中高表达

TCGA数据分析显示，10个CRGs中CDKN2A表达量在HCC组织显著高于癌旁（P<0.001），且在GSE36376和GSE76427数据集得到验证。CDKN2A突变频率达8%，是CRGs中最高者。值得注意的是，CDKN2A表达随肿瘤分期和病理分级升高而递增（图1E），提示其与疾病进展密切相关。

功能机制揭示细胞周期调控核心作用

对CDKN2A共表达基因的富集分析显示，该基因主要参与DNA复制、细胞器分裂、染色体分离等生物学过程（图2A-C）。KEGG通路分析突出显示了Fanconi贫血通路、同源重组和细胞周期等关键通路（图2D）。GSEA进一步证实CDKN2A与Rho-GTPases、M期调控和p53转录调控等通路显著相关（图2E），这些发现为CDKN2A促进HCC进展提供了分子解释。

免疫微环境调控呈现双面性

免疫浸润分析发现高CDKN2A表达组呈现独特的免疫特征：树突状细胞(DC)和Th2细胞浸润增加，而CD8⁺T细胞和自然杀伤(NK)细胞减少（图3A-B）。特别是CDKN2A与DC标志物(CD83/CD86)及免疫检查点(CD274/PDCD1)表达正相关（图3C-D），暗示其可能通过调节抗原提呈影响免疫治疗效果。

独立预后价值获多维度验证

生存分析显示，CDKN2A高表达患者总生存期(OS)和无进展间隔(PFI)显著缩短（图4A-B）。多因素Cox回归证实CDKN2A是独立预后因素（HR=1.52, P=0.032）。整合CDKN2A表达与肿瘤分期构建的列线图，在1/3/5年生存率预测中表现出良好校准性（图5）。最后，免疫组化证实HCC组织中CDKN2A蛋白水平显著高于正常肝组织（图6）。

这项研究系统阐明了CDKN2A作为铜死亡相关基因在HCC中的双重作用：既通过调控细胞周期驱动肿瘤进展，又重塑免疫微环境影响治疗效果。提出的"CDKN2A-免疫浸润-预后"关联模型为HCC分层治疗提供了新思路，其构建的预后预测工具具有直接临床转化价值。局限性在于样本量较小且缺乏功能实验验证，未来需通过类器官模型和基因编辑技术深入探索CDKN2A在铜死亡中的精确调控机制。该成果为开发针对CDKN2A的靶向免疫联合疗法奠定了理论基础。