IL-7-PD-L1纳米抗体介导的"拉链效应"增强肿瘤浸润淋巴细胞杀伤活性的机制研究

本研究针对肿瘤微环境(TME)抑制肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)功能的临床难题，通过基因工程改造TILs使其共表达TIGIT shRNA、IL-7-PD-L1纳米抗体融合蛋白及安全开关HuEGFRt。改造后的TILs表现出更强的增殖能力、干细胞样特性及持续杀伤活性，同时降低对IL-2的依赖。动物实验证实其显著抑制肿瘤生长，为TILs疗法临床应用提供了新策略。

　　

癌症治疗领域长期面临肿瘤微环境(TME)抑制免疫细胞功能的难题。尽管肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)疗法在多种临床研究中展现出延长患者生存期的潜力，但TME导致的T细胞耗竭和功能障碍严重制约其疗效。特别值得注意的是，PD-1/PD-L1免疫检查点通路和TIGIT抑制性受体共同构成了T细胞功能的"刹车系统"，而IL-2依赖性又带来治疗毒性风险。这些因素如同套在TILs疗法颈上的多重枷锁，亟需创新性解决方案。

为突破这些限制，Zhongjie Yu和Zhen Guo等研究者开展了一项开创性研究。团队采用多基因工程策略改造TILs：通过慢病毒载体同时导入TIGIT shRNA降低抑制性信号，表达IL-7-PD-L1纳米抗体融合蛋白实现双功能调控，并引入HuEGFRt安全开关确保可控性。这种"三位一体"的设计理念巧妙整合了增强活性、解除抑制和保障安全三大要素。

关键技术方法包括：1) 慢病毒载体介导的TILs基因工程改造；2) 融合蛋白IL-7-PD-L1纳米抗体的构建与表达验证；3) 体外重复杀伤实验评估持续细胞毒性；4) 免疫缺陷小鼠CDX模型进行体内疗效评价；5) HuEGFRt分子开关的安全性验证体系。

研究结果部分呈现了系列重要发现：

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   工程化TILs的优越特性

   改造后的1#和3# TILs在100U/mL IL-2条件下表现出显著增殖优势，干细胞样细胞(CD39^-CD69^-)比例在CD8⁺和CD4⁺亚群中均明显增加。IL-7-PD-L1融合蛋白通过"拉链效应"促进TILs与肿瘤细胞间相互作用，同时阻断PD-L1/CD80结合以增强CD80-CD28共刺激信号。

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   工程化TILs的肿瘤杀伤活性

   经过三轮肿瘤细胞攻击后，1#和3# TILs仍保持近90%的杀伤效率，IFN-γ和颗粒酶B分泌量显著高于对照组。特别值得注意的是，融合蛋白形式表达的IL-7-PD-L1比单独表达组(4#)展现出更强的协同效应，证实"拉链效应"的关键作用。

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   体内治疗效果验证

   小鼠模型中1# TILs治疗组肿瘤体积在第25天缩小约70%，显著优于其他组别。TIGIT shRNA的联合应用进一步增强了3# TILs的持久活性，印证了多重改造策略的协同价值。

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   安全性验证

   HuEGFRt开关介导的Cetuximab特异性清除效率达95%以上，血液指标监测未发现治疗相关毒性，为临床转化提供了安全保障。

这项发表于《Experimental Hematology》的研究具有多重突破意义：首先，IL-7-PD-L1融合蛋白的创新设计实现了"靶向递送细胞因子"和"阻断免疫检查点"的双重功能，其"拉链效应"为增强免疫细胞-肿瘤细胞相互作用提供了新思路；其次，TIGIT shRNA的联合应用有效缓解了T细胞耗竭问题；最后，模块化的工程平台可扩展至其他癌症类型治疗。该研究不仅为TILs疗法临床转化扫清了关键技术障碍，更为发展下一代实体瘤免疫治疗方案提供了范式参考。特别对于PD-L1阳性肿瘤患者，这种改造策略可能实现"低细胞剂量、高治疗效果"的突破，具有重要的临床转化前景。