L-/D-酪氨酸取代N端苯丙氨酸的新型FELL类似物合成及其镇痛与抗炎活性研究

推荐：本研究针对疼痛与炎症共病的治疗难题，通过固相合成技术设计FELL四肽的N端L-/D-Tyr取代类似物（BB9/BB10/BB15/BB16），发现L-Tyr-CONH2型化合物BB9的镇痛效果优于母体分子（PP阈值提升30%），且通过纳洛酮/AM251拮抗实验证实其作用涉及μ-OR和CB1r双通路，为开发非NSAIDs类双功能药物提供新思路。

　　

疼痛与炎症是困扰全球数亿人口的重大健康问题，现有非甾体抗炎药（NSAIDs）长期使用易导致消化道出血等副作用。针对这一临床困境，保加利亚化学技术与冶金大学的Boryana Borisova团队在《Current Research in Biotechnology》发表研究，通过结构优化开发新型镇痛抗炎肽。

研究灵感来源于两个关键发现：一是源自CABS1蛋白的FELL四肽（Phe-Glu-Leu-Leu）具有显著抗炎特性，能减少肺部51%的中性粒细胞浸润；二是内源性脑啡肽（如Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu）通过Tyr芳香羟基与阿片受体(μ-OR/δ-OR)结合发挥镇痛作用。基于"消息-地址"(message-address)假说，团队用L/D-酪氨酸取代FELL的N端苯丙氨酸，并设计C端羧基/酰胺变体，旨在开发兼具双重活性的稳定肽类药物。

研究采用固相肽合成(SPPS)制备4种新型类似物，通过足压阈值(PPT)和角叉菜胶诱导爪水肿实验评估活性，结合纳洛酮(μ-OR拮抗剂)和AM251(CB1r反向激动剂)解析作用机制。水解稳定性实验模拟胃肠环境(pH2/7.4/9)，采用含胃蛋白酶/胰酶的缓冲体系。

2.1 合成与表征

通过Fmoc/t-Bu策略合成L/D-Tyr-Glu-Leu-Leu-OH/NH₂系列化合物，HPLC纯度>94%。其中L-Tyr-CONH₂型BB9收率最高(89%)，D-Tyr-COOH型BB16比旋光度达-30°·dm^-1·cm³·g^-1，显示立体构型显著影响物化性质。

2.2 镇痛活性

PPT实验显示L-Tyr类似物呈U型量效曲线：BB9在10分钟时镇痛效果超越对照药美洛昔康(+++p<0.001)，40分钟再现峰值。D-Tyr型BB16则呈现渐进式增强，50分钟达等效。纳洛酮预处理使BB9镇痛消失时间提前至10分钟，而BB16延迟至30分钟，提示L型更依赖μ-OR早期激活。

2.3 抗炎活性

母体分子BB11在3小时抑制43.5%爪水肿(p=0.047)，但修饰后活性降低。L-Tyr型BB15仅维持65.5%基础活性，D-Tyr型BB10反而在4小时加重炎症20%，显示Tyr取代可能破坏原有抗炎构效关系。

2.4 水解稳定性

所有化合物在模拟胃肠环境中24小时保持完整，胰酶(pH7.4)和胃蛋白酶(pH2)均未引显著降解，证实结构修饰未牺牲代谢稳定性。

讨论部分指出三个关键突破：1）L-Tyr芳香羟基通过类似脑啡肽的YGGF模体增强μ-OR结合，BB9的CONH₂修饰进一步延长作用时间；2）双相镇痛曲线提示存在OR/CB1r协同机制，AM251拮抗使BB15早期出现痛觉过敏，证实内源性大麻素系统参与；3）D型异构体虽提高稳定性，但抗炎活性损失提示立体选择性在双功能设计中的复杂性。

该研究为多靶点肽类药物的开发提供重要范式：通过N端Tyr实现"消息"功能靶向OR，C端酰胺化调节药代动力学，而中间Glu-Leu-Leu序列可能作为"地址"域影响组织分布。未来可结合CADD（计算机辅助药物设计）优化疏水性，或通过Pro-Leu-Gly-NH₂(MIF-1)等模块进行嵌合设计，有望突破现有NSAIDs的治疗瓶颈。